[发明专利]一种大肠菌群的快速检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种可视化大肠菌群环介导等温扩增(LAMP)检测试剂盒，其特征在于，由反应预混液、荧光显色剂、内盖附有灭菌滤纸片的检测管组成，其中的反应预混液包括Bst DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、特异性引物组、甜菜碱和无菌双蒸水；

所述特异性引物组包括外引物F3和B3，内引物FIP和BIP，其核苷酸序列如下：

F3：5’-AGCTGGTCTGAGAGGATGAC-3’

B3：5’-CGGGTAACGTCAATGAGCAA-3’

FIP：5’-GCGCCCATTGTGCAATATTCCCTTTTCCACACTGGAACTGAGACAC-3’

BIP：5’-AAGCCTGATGCAGCCATGCCTTTTTTCCTCCCCGCTGAAAGT-3’。

2.所述试剂盒的应用，其特征在于，通过对样品简单的处理便可快速检测样品中的大肠菌群是否合格；使用方法包括待检样品中细菌DNA的提取、环介导等温扩增和显色结果判定：

1）、待检样品中细菌DNA的提取：

采用DNA快速提取法，即将样品稀释液煮沸，上清液作为环介导等温扩增反应的DNA模板；

2）、LAMP扩增：

采用25μl反应体系：内引物FIP和BIP各1.6μM，外引物F3和B3各0.2μM，dNTP 1mM，甜菜碱0.5M，硫酸镁6mM，Bst DNA聚合酶8U，模板DNA 5μl，10×ThermoPol Reaction Buffer 2.5μl，选择64℃避光反应60分钟；

3）、检测结果判定：

将检测管倒置甩动，使反应液与内盖上的滤纸片充分混匀，室温放置2分钟；正置后用力甩动检测管，使管内混有荧光显色剂的反应液聚于检测管底部，在比色卡背景下观察反应液颜色：黄绿色则说明样品中的大肠菌群不合格，棕色则说明样品中的大肠菌群合格。