[发明专利]水稻抗稻瘟病基因Pi1的特异性分子标记及其专用引物

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一种水稻抗稻瘟病基因Pi1的特异性分子标记及其专用引物。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，全球约一半以上的人口以稻米作为主食。稻瘟病是由子囊菌(Magnaporthe grisea(Hebert)Barr)引起的广泛发生在世界各稻区的重要病害之一，严重威胁着世界的粮食安全。目前主要通过化学防治和种植抗性品种来控制稻瘟病。化学防治在一定程度上能减轻病害、减少产量损失，但对环境造成污染，因而通过选育抗病品种来预防稻瘟病是最佳选择，但由于其病菌小种遗传的复杂性和致病性的多样性，抗病新品种在推广3-5年后丧失抗性。目前，抗稻瘟病分子标记辅助育种主要利用与抗稻瘟病基因紧密连锁的分子标记进行辅助选择，大大提高了育种效率，但往往也存在分子标记与抗病基因不连锁导致辅助选择失败的情况。而利用抗病基因序列建立与稻瘟病抗病基因完全共分离的基因标签，则能让辅助选择理论上达到100％的准确性。

抗稻瘟病基因Pi1是较为广谱的抗性基因，但目前尚未有基因内特异性标记开发应用的报道。

目前，跟踪抗稻瘟病基因Pi1的分子标记一般用紧密连锁的SSR标记RM224或MGR4766，距离Pi1均有一定的距离，选择效率无法达到100％；也无法直接用来检测水稻样品中是否含有Pi1基因。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，开发一种水稻抗稻瘟病基因Pi1的特异性分子标记。本发明的目的还在于提供扩增该特异性分子标记的专用引物(引物对)。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种获得水稻抗稻瘟病基因Pi1的特异性分子标记的引物对，其正向引物为：GTGCTGCTGTGGCTAGTTTG，反向引物为：AGTCCCCGCTCAATTTTTCT。

所述的水稻抗稻瘟病基因Pi1的特异性分子标记为用上述引物对在含Pi1的C101LAC序列中扩增出来的核苷酸序列。

所述的引物对及分子标记可用于检测水稻样品是否含有抗稻瘟病基因Pi1。

通过本发明的特异性分子标记及专用引物能特异检测水稻样品中是否含有抗稻瘟病基因Pi1，100％准确跟踪遗传分离群体中的抗稻瘟病基因Pi1存在与否。

附图说明

图1是用引物对M-Pi1检测72个水稻品系的电泳图(部分)，1为Marker2000，从上到下的条带依次为2000、1000、750、500、250、100bp；条带2为水稻品系中编号为1含抗稻瘟病基因Pi1的单基因系IRBL1-CL，其余品种名见表1。

图2是用引物对M-Pi1检测LTH/IRBL1-CL的F2代单株的电泳图，1为Marker2000，从上到下的条带依次为2000、1000、750、500、250、100bp；有条带的单株对稻瘟病叶瘟表现为抗(R)，无带的单株对稻瘟病叶瘟表现为感病(S)。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明做进一步详细的描述。应理解，下面的实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

根据抗稻瘟病基因Pi1与其等位基因Pikm，日本晴上的感病基因序列比对，设计出了能特异跟踪Pi1的引物对，命名为M_Pi1，其中，正向引物：GTGCTGCTGTGGCTAGTTTG，反向引物：AGTCCCCGCTCAATTTTTCT。

用引物对M_Pi1在含Pi1的C101LAC序列中可扩增出460bp的片段，该片段即为本发明水稻抗稻瘟病基因Pi1的特异性分子标记。

实施例2特异性检验

1.材料与方法

1.1水稻材料：水稻品系共72份(表1)。

1.2水稻基因组DNA提取

分别取种植于南宁的72份水稻叶片，通过CTAB法(Murray M G,ThompsonW F.Rapid isolation ofhigh molecular weight plant DNA.Nucleic Acids Research,1980,8(19):4321-4326.)提取水稻基因组DNA。

1.3PCR扩增