[发明专利]一种二歧银莲花的组培繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是一种适用于二歧银莲花的组培繁殖方法。

背景技术

二歧银莲花(学名：Anemone dichotoma L.)是草本植物，植株高35-60厘米。基生叶1，总苞苞片2，扇形，三深裂近基部。花单生于花序分枝处；萼片5，白色或带粉红色，倒卵形或椭圆形，心皮约30，子房长圆形，有向外弯的短花柱。瘦果扁平，卵形或椭圆形，有边缘和稍弯的宿存花柱。6月开花。生丘陵或山坡湿草地或林中。分布于亚洲北部和欧洲、中国吉林和黑龙江。

目前，利用组培技术繁育二歧银莲花的技术尚未有人研究，组织培养体系尚未建立，优良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧，严重影响了二歧银莲花的园林应用和推广。

发明内容

本发明针对现有的不足提供了一种二歧银莲花的组培繁殖方法。

本发明通过以下方法实现上述目的。

一种二歧银莲花的组培繁殖方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

(1)外植体的选择：于4～7月采取生长健壮的二歧银莲花幼嫩茎段作外植体；

(2)材料处理方法：先用软毛刷将二歧银莲花表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗3分钟后用紫外灯照射20min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70％的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了2～3滴土温80的0.1％的升汞溶液中浸泡2-3min，再用无菌水冲洗2～3次，最后在无菌条件下分割材料，茎段切割成0.6～0.8cm长；

(3)初代培养：在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了2.2mg/L的2,4-D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH 6.6，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2300-2500lux，待新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段；

(4)增殖培养：将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了2.2mg/L的2,4-D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH 6.6，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2300-2500lux，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；

(5)生根培养：将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了2.4mg/L的IAA、0.5mg/L的NAA，1.5mg/L的KT，PH 6.6，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为1900lux，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段；

(6)炼苗移栽：先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的45％，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰∶珍珠岩：沙子：蛭石＝2∶2∶1：1的混合基质中，温度控制在2:3℃，前5d湿度控制在80％左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。

有益效果：本发明对二歧银莲花采用组织培养技术，以嫩茎段为外植体，经外植体灭菌、初代培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽步骤，研究培养过程中试管苗的营养需求、激素对苗木生长分化的调控，解决二歧银莲花的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，建立了完善的二歧银莲花组织培养体系，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述实施例仅用于说明本发明，对本发明并没有限制。

二歧银莲花的组培繁殖方法，该方法包括下列步骤：

(1)外植体的选择：于4～7月采取生长健壮的二歧银莲花幼嫩茎段作外植体；

(2)材料处理方法：先用软毛刷将二歧银莲花表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗3分钟后用紫外灯照射20min，转入超净工作台，在超净工作台上先用70％的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了2滴土温80的0.1％的升汞溶液中浸泡2min，再用无菌水冲洗2次，最后在无菌条件下分割材料，茎段切割成0.7cm长；

(3)初代培养：在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在1/2MS常规培养基中添加了2.2mg/L的2,4-D、0.8mg/L的NAA、0.5mg/L的GA，PH 6.6，培养温度为24℃，光照周期13h/d，光强度为2400lux，待新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段；