[发明专利]用于防治仿刺参腐皮综合症的微生态制剂及制备方法

说明书

一种用于防治仿刺参腐皮综合症的微生态制剂及制备方法，属于水产微生物领域，其活性成分为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)H1的菌体和它的胞外代谢产物；该菌株是从山东蓬莱健康养殖的仿刺参肠道粪便分离获得，通过安全性、抑菌活性、毒性检测以及人工拮抗灿烂弧菌实验，证实巨大芽孢杆菌H1菌株能拮抗灿烂弧菌，有效地保护仿刺参稚参，用于防治由灿烂弧菌引起的仿刺参“腐皮综合症”，提高仿刺参保苗期的成活率。

技术领域：

本发明属于水产微生物领域，具体涉及一种用于防治仿刺参“腐皮综合症”的微生态制剂及制备方法。

背景技术：

仿刺参(Apostichopus japonicas Selenka)养殖以其单种类产值最高和每年20％的增长速度，成为我国水产养殖业的重要支柱之一。2011年度，山东省仿刺参的养殖面积达5.3万公顷，年产量7.1万吨(超过全国总产量一半)，年产值达160亿元。然而，近年来随着刺参养殖规模的不断扩大，各种病害接踵而至，严重制约了该产业的健康、可持续发展。仿刺参保苗期和养成期发生的“腐皮综合症”波及面广，传染性强，死亡率极高，造成了惨重的经济损失。其症状主要表现为：厌食、摇头、肿嘴、排脏、身体萎缩、口部溃烂乃至体表大面积溃疡；每年的1-4月份养殖水体温度较低时(＜8℃＝是发病高峰，这种病在育苗场多发生在2、3月份，池塘养殖则多发生在3、4月份，其高感染率通常引起成参50％的死亡率和稚参的全部死亡，属于急性死亡。而灿烂弧菌(Vibrio splendidus)是引起养殖刺参“腐皮综合症”的主要病原菌之一，其致病力强，既能引起仿刺参表皮溃疡，也能诱发稚参烂胃病。

为了控制仿刺参病害的发生，许多养殖户选择大量使用抗生素，而长期使用抗生素会导致药物的残留、养殖环境恶化、病原耐药性增强等负面影响。近年来，抗生素已经陆续被许多国家明令禁止作为饲料添加剂来使用，并严禁直接向养殖水域中泼洒抗生素。因此，通过益生菌抑制病原微生物，调节养殖动物肠道微生态平衡，增强养殖动物免疫力以及安全环保的生物防治手段在水产养殖业中得到越来越多的关注。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种用于防治仿刺参“腐皮综合症”的微生态制剂及制备方法，所述微生态制剂的是包括巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)H1及其胞外代谢产物，该菌株是从山东蓬莱健康养殖的仿刺参肠道粪便分离获得，通过安全性、抑菌活性、毒性检测以及人工拮抗灿烂弧菌实验，证实巨大芽孢杆菌H1菌株能拮抗灿烂弧菌，有效地保护仿刺参稚参，用于防治由灿烂弧菌引起的仿刺参“腐皮综合症”，提高仿刺参保苗期的成活率。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种用于防治仿刺参“腐皮综合症”的微生态制剂，其活性成分为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)H1的菌体和它的胞外代谢产物；

巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)H1分离自山东蓬莱健康养殖的仿刺参(Apostichopus japonicas Selenka)肠道粪便。该菌株于2014年10月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.9883,保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。

进一步，上述微生物制剂为液体制剂。

本发明还提供一种上述微生态制剂的制备方法，具体包括如下步骤：菌种活化、种子液制备和发酵培养；

(1)菌种活化：将保存的巨大芽孢杆菌H1菌株在胰蛋白胨大豆琼脂培养基上划线活化，再挑取单菌落接种于胰蛋白胨大豆琼脂斜面培养基上，28℃培养24小时，获得活化巨大芽孢杆菌H1菌株；

(2)种子液制备：无菌条件下将步骤(1)活化的巨大芽孢杆菌H1菌株接种至无菌胰蛋白胨大豆肉汤液体培养基中，在28-30℃、摇床转速150-170rpm条件下培养20-24小时，获得巨大芽孢杆菌H1种子液；