[发明专利]一种用于质粒提取的磁流体的制备方法

说明书

 

技术领域

    本发明属于磁性颗粒的制备领域，具体涉及一种用于质粒提取的磁流体的制备方法。

背景技术

质粒提取是指去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。质粒提取是基因工程中的经常性操作，也是载体构建中不可缺少的一个环节。

质粒提取基本上是采用两种办法：一是利用酶/弱去污剂部分裂解细菌，在抽提时只让质粒从细菌中释放出来，而不让基因组 DNA 从细菌中出来，从而将质粒和基因组 DNA 分开；二是利用 NaOH/SDS 完全裂解细菌，让质粒和细菌基因组 DNA 都从细菌中出来，再利用质粒和基因组 DNA 在变性/复性过程中的不同表现，将质粒与基因组 DNA 分开。

方便快捷的质粒提取方法，在基因遗传工程中十分重要。利用磁流体提取质粒具有以下好处：磁性粒子具有超顺磁性, 在磁场中有较强的磁性, 去掉磁场后磁性很快消失, 在磁场中不被永久磁化, 故可在外加磁场(如磁铁)作用下, 快速、方便地分离和纯化目标质粒，无需离心等繁琐的操作。目前的磁流体制备成本高，磁性粒子在缓冲溶液中的稳定性差，放置1个月、甚至几天后，其纯化效果降低，这些都限制了磁流体在质粒提取操作中的广泛使用。此外，目前的磁流体中含有某些基团，容易混合在提取的质粒中，影响质粒后续的酶切、转化等操作。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，制备而成的磁流体磁响应性好，在不同缓冲液中对质粒的吸附和解吸效果佳，能方便迅速地实现质粒的分离或纯化。本发明采用如下技术方案：

    一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

a、将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，然后搅拌混合，得到混合液A；

b、向混合液A中逐滴加入羟基乙叉二膦酸，继续搅拌5~9h，得到黑色溶液A，用外加磁场从黑色溶液A中分离得到黑色固体A；

c、将黑色固体A分散在去离子水中，加入聚醚酰亚胺，超声振荡5~12h，得到黑色溶液B，用外加磁场从黑色溶液B中分离得到黑色固体B；

d、将黑色固体B干燥，研磨成200目~500目的细粉，然后分散在去离子水中，即得所述的磁流体。

    优选地，步骤a中所述的硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠的水溶液的混合比例按溶质的摩尔份数计，为2：1：8。

    优选地，步骤a中所述的搅拌混合时间为5~10h；所述的搅拌混合的同时采用油浴加热，加热温度为30~50℃。

优选地，步骤b中所述的用外加磁场从黑色溶液A中分离得到黑色固体A包括以下内容：从黑色溶液A中用外加磁场收集固体后，用无水乙醇清洗固体2~3次，然后用去离子水清洗固体直到清洗液的pH=6.7~7，用外加磁场收集固体，即为所述的黑色固体A。

本发明的有益效果如下：

1. 本发明提供的用于质粒提取的磁流体的制备方法中，在高碱性环境下催化制备四氧化三铁-二氧化硅核壳结构的磁性纳米粒子，采用羟基乙叉二膦酸作为分散剂，制得的磁流体在溶液中的分散性好，增大与质粒的接触面积。

2. 本发明提供的用于质粒提取的磁流体的制备方法中，采用聚醚酰亚胺对磁性粒子进行表面改性，得到表面有氨基修饰的磁性粒子，便于对质粒纯化。

3. 本发明提供的用于质粒提取的磁流体的制备方法，制备而成的磁流体磁响应性好，长期保存仍具有活性，在0~4℃下保存2年以上，对质粒的吸附效果几乎没有减少；制备而成的磁流体在碘化钠等溶胶液中，能很好地吸附核酸，在去离子水或TE缓冲液中，又能很好地将质粒解吸下来，达到质粒的快速分离和纯化，无需离心操作，操作过程中，质粒损失少，并且不影响质粒后面的酶切、扩增、转化等操作。

具体实施方式

以下实施例是为了更好地说明本发明的具体内容，并不用于限制本发明的保护范围。

实施例1

     一种用于质粒提取的磁流体的制备方法，包括以下步骤：

a、将硝酸铁、硝酸亚铁和氢氧化钠分别配制成水溶液，水溶液的混合比例按溶质的摩尔份数计，为2：1：8；然后在油浴加热条件下搅拌混合，加热温度为30~40℃，搅拌混合时间为5~7h，得到混合液A；