[发明专利]一种白介素6定量测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医疗器械生物类免疫体外诊断领域，具体涉及一种基于磁微粒分离化学发光法定量检测血液中白介素6的试剂盒及其制备方法，以及应用该试剂盒定量检测血液中白介素6的方法。

背景技术

白介素6(IL-6)是一种细胞因子，属于白细胞介素的一种，能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。激活的淋巴细胞、单核巨噬细胞、骨髓细胞和部分肿瘤细胞可以合成和分泌IL-6，其作为一种机体在免疫应答中产生的重要介质,具有多种生物学活性。

IL-6及其受体与炎症性疾病的有关，它是多功能炎性细胞因子，是炎性介质网络的关键成份，在炎症反应中起重要作用。IL-6水平上升可作为炎症反应的早期指标，并可用于评估系统性炎症反应综合征的严重程度(SIRS)。IL-6与多种肿瘤发生、发展关系密切，它通过干预细胞的黏附性和活动力、血栓形成、肿瘤特异性抗原的表达及肿瘤细胞的增殖，从而影响肿瘤的进展。IL-6的脐带血是早产儿预测早发性败血症最显著变量，而IL-6在母体血液是表示宫内环境，故同样可用于识别怀孕。童年期较高的血IL-6水平与日后罹患抑郁及精神病的风险升高相关。体内IL-6的水平上升，可以导致多种疾病如:甲状腺疾病、免疫异常性疾病、脓毒血症、肾小球肾炎的肾小球增殖，克罗恩病(CD)和Castleman氏病等。

在国内，白介素6(IL-6)检测临床上主要以国外进口试剂和免疫组化试剂应用为主，国外进口试剂价格非常昂贵，给患者带来很大的经济负担，不利于在基层普及。具有自主知识产权的国产白介素6(IL-6)免疫化学发光检测试剂盒目前还较少，也仅停留在96孔微孔板式技术水平上。该技术灵敏度较低、线性窄、特异性较差，也不利于高通量的全自动检测。

因此，有待开发对白介素6(IL-6)检测灵敏度高与可靠性并能降低检测成本的检测技术。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的旨在提供一种白介素6定量测定试剂盒，该试剂盒能够有效提高检测灵敏度及可靠性，并降低成本，延长有效期。

实现本发明的目的可以通过采取如下技术方案达到：

一种白介素6定量测定试剂盒，其包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；该试剂盒包括校准品、质控品、抗试剂、磁微粒试剂和发光底物；所述磁微粒试剂是将抗异硫氰酸荧光素抗体与羧基磁珠偶联制成，所述发光底物是将ALPS溶解于发光底物缓冲液中制成。

另一方面，本发明还提供了这种白介素6定量测定试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

分别配制白介素6校准品、白介素6质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物；将白介素6校准品、白介素6质控品、抗试剂、磁微粒试剂、发光底物独立地置于包装容器内，得到白介素6的定量测定试剂盒。

本试剂盒的异硫氰酸荧光素标记的白介素6包被抗体为能与人体内白介素6抗原特异结合的单克隆抗体，所述碱性磷酸酶标记的白介素6标记抗体为能与白介素6抗原特异结合的单克隆抗体。包被抗体和标记抗体除能与白介素6抗原特异性结合外，配对使用时可与抗原形成“三明治”夹心结构。

具体地，所述白介素6定量测定试剂盒按照如下方法制备而成：

A、白介素6校准品、白介素6质控品的配制方法如下：

用标准品缓冲液溶解白介素6，配置白介素6校准品、白介素6质控品；其中，所述校准品缓冲液是通过在1L新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四环素和0.1g～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后经过0.22μm滤膜处理制备而成；

B、抗试剂的制备方法如下：

1)抗试剂缓冲液的制备：

将12.12mg～60.57mg的Tris、0.01g～0.05g的四环素、1g～5g的绵羊血清、3g～10g的新生牛血清、1g～5g的马血清加入1L纯化水中，充分搅拌至完全溶解，制得抗试剂缓冲液；

2)异硫氰酸荧光素与白介素6偶联，获得异硫氰酸荧光素标记的白介素6包被抗体：

首先用抗试剂缓冲液将异硫氰酸荧光素配制成浓度为1.0～5.0mg/mL的异硫氰酸荧光素溶液，使用分光光度计在495nm处读取吸光值，来调整浓度，然后按照白介素6抗体与异硫氰酸荧光素的质量之比为1:1.1，将二者同时转移到棕色玻璃瓶中，室温下搅拌1～2小时，充分反应后使用pH为8～9的碳酸氢盐缓冲液进行平衡，然后使用凝胶层析分离纯化得到异硫氰酸荧光素标记的白介素6包被抗体；紫外监测，记录仪记录纯化图谱，同时注意确认含有连接物的试管，注意、避光防护；