[发明专利]用于鉴别和制备(R)-特异性ω-转氨酶的方法

权利要求书

1.制备光学活性手性胺的方法，其包括：

a)提供至少一种(R)-选择性ω-转氨酶的至少一个查询生物分子序列，和至少一个生物分子库，其中所述查询生物分子序列如SEQ ID NO:5或7或编码SEQ ID NO:5或7的相应核苷酸序列所示，所述生物分子库是NCBI的pubmed蛋白数据库或核苷酸数据库；

b)用所述查询生物分子序列检索所述生物分子库，以鉴别出第一靶生物分子序列组，其中以氨基酸水平计算，所述第一靶生物分子序列与所述查询生物分子序列具有至少20％的序列相同性；

c)在所述第一靶生物分子序列组中选择第二生物分子靶序列组，所述第二生物分子靶序列组在氨基酸水平上不包含以下氨基酸序列基序c1)至c3)中的至少一种，其中

c1)在95位至97位的氨基酸序列Tyr Xa1Xa2，其中Xa1为氨基酸Ile、Val、Leu、Met、Phe，且Xa2为氨基酸Arg或Lys，或者

c2)在97位至99位的氨基酸序列Tyr Xaa Gln，其中Xaa为氨基酸，和在105位至111位的氨基酸序列Arg Xaa Xa3，其中Xa3为氨基酸，或者

c3)在38位的Thr、在97位的Lys和在107位至109位的氨基酸序列Arg Xa4Xa5，其中Xa4为氨基酸，且Xa5为氨基酸；

而包含：

c4)在95位除Tyr、Arg、Lys外的另一种氨基酸，或在95位的Tyr，但在97位无Arg或Lys，且

c5)在40位无Lys或Arg，且

c6)在161位至165位区域中的至少一个Lys，

以鉴别出第二靶生物分子序列组，和

d)提供生物分子，其具有在步骤c)中鉴别的第二靶生物分子序列，且为具有(R)-选择性ω-转氨酶活性的蛋白或至少部分编码具有(R)-选择性ω-转氨酶活性的蛋白，

e)使至少一种氨基受体和至少一种氨基供体与步骤d)所述生物分子对应的具有(R)-选择性ω-转氨酶活性的蛋白反应，并获得所述光学活性手性胺。

2.如权利要求1所述的方法，其中Xa3为His。

3.如权利要求1所述的方法，其中Xa4为Gly。

4.如权利要求1所述的方法，其中Xa5为Tyr。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述生物分子为蛋白，且所述生物分子序列为氨基酸序列。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述生物分子为DNA分子，且所述生物分子序列为DNA序列。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述生物分子库为生物分子数据库，且在步骤b)中使用生物分子序列比对工具检索所述生物分子数据库。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述生物分子序列比对工具是BLAST。

9.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中通过从头合成提供步骤d)中所提供的蛋白质或DNA分子。

10.如权利要求7所述的方法，其中通过从头合成提供步骤d)中所提供的蛋白质或DNA分子。

11.如权利要求1-4和6中任一项所述的方法，其中所述生物分子库为基因库，且在步骤b)中使用查询DNA序列分子检索所述基因库。

12.如权利要求11所述的方法，其中在步骤c)中使用DNA序列引物选择所述第二生物分子序列组。

13.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述具有(R)-选择性ω-转氨酶活性的蛋白是序列如SEQ ID NO.3所示的生物分子序列。