[发明专利]一种苹果树苗组织培养繁育方法

说明书

技术领域

本发明涉及果树繁育技术领域，具体是一种苹果树苗组织培养繁育方法。

背景技术

苹果，落叶乔木，叶子是椭圆形，有锯齿，花白色带有红晕。果实圆形， 味道甜或略酸，是常见水果，具有丰富营养成分，有食疗、辅助治疗功能，是 世界四大水果之一。苹果通常为红色，不过也有黄色和绿色，是植物的果实。 苹果原产于欧洲、中亚、西亚和土耳其一带，于十九世纪传入中国。中国是世 界最大的苹果生产国，在东北、华北、华东、西北和四川、云南等地均有栽培。 苹果是普通的水果，也是最常见的水果，富含丰富的维生素营养，是世界四大 水果(苹果、葡萄、柑桔和香蕉)之冠。

苹果性喜冷凉干燥、日照充足的气候条件。一般认为，4～10月生长期的平 均气温12度～18度最适于苹果的生长。夏季温度过高，平均气温＞26度时， 花芽分化不良，果实发育快，不耐贮藏。红色品种成熟前适宜的着色温度为10 度～20度，如昼夜温差小，夜温高，则上色困难。对照谁北地区气候条件，尤 其是中熟红色品种在温度方面离最适要求有一定的差距，往南至长江流域，则 这种差距加大。

组织培养繁殖是在人工培养基中，使离体组织细胞培养成为完整植株的繁 殖方法。果树的组织培养材料是植株离体材料，称外植体。用顶端分生组织及 其下的第1-2个叶原基切离培养的，称茎尖培养；以小段成熟枝条进行培养的称 茎段培养；以叶片或叶鞘组织进行培养的，称叶片培养。利用组织培养方法繁 殖果树植株具有占地面积小，繁殖周期短，全年都能进行繁殖，繁殖系数高等 特点。还可以消除果树的某些病毒病，适应果树向品种更新快、矮化密植以及 无病毒栽培方向发展的需要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采用组织培养技术，快速繁殖无毒树苗的方法。

根据上述目的提出具体方案，包括以下步骤：

(1)外植体选择

在春季温度达到15℃以上，挑选种性优良，树体健康，无病虫害，生长健 壮发育饱满的嫩枝；

(2)外植体脱毒

将所选的嫩枝，用清水冲洗干净，在无菌实验室内用75％酒精的酒精消毒 30s，再用0.1％的升汞灭菌5-10分钟，用无菌水冲洗3次，滤纸吸干水分后备 用；

(3)增值培养

将嫩枝切成1.5-2cm的带腋芽的小段，接到培养基上培养，愈伤组织诱导培 养基为MS,长出芽尖2cm时，接种到培养基中增值培养；若所选的外植体为茎 尖和叶芽时不用这一步骤，但消毒直接接种到培养基中增值培养；置于25-30℃ 恒温和1500-3000勒克斯(lx)光照强度，每日光照16小时的条件下培养；培养基 使用MS培养基，加入生长素NAA0.05mg/L和细胞分裂素BA0.5mg/L.分化芽的 数目明显增大；

(4)生根培养

当在三角瓶中增值培养到35-45天后，观察增值培养苗木的生长情况，将生 长健壮的苗木接种到生根培养中生根培养40-50天，都苗木长至8-10cm，根大 于5cm时，即可移栽；采用含盐低的培养基。置于25-30℃恒温，光照强度一般 要求在2000勒克斯(lx)以上；培养基为：MS+0.34mg/LIBA+0.5mg/LNAA；

(5)移栽

选择根生长好的幼苗，置于温室大棚中放置1-2天后，去掉三角瓶塞，放置5-10 天，看到瓶中苗尖生长到瓶口时，即可移栽到苗圃里；温室温度在15-25℃，湿 度保持在在82-90％；用镊子从瓶中轻轻取出，洗掉附着于根部的培养基，摘去下 部叶片，用600倍多菌灵蘸根，栽入基质为河沙或疏松肥沃的沙质壤土的育苗营 养钵中，每个营养钵中栽入4个小苗，得到幼苗。

所述移栽的苗床由土：锯末：腐熟有机肥0.5：1：0.5。

本发明的有益效果在于：

(1)再生植株在遗传上比较稳定，自发变异频率低；

(2)植株再生所需的时间短，植株粗壮，适应性强，移栽成活率高

具体实施方式

实例1

(1)外植体选择

挑选种性优良苹果树种，挑选出饱满的嫩枝；

(2)外植体脱毒

将所选的嫩枝，用清水冲洗干净，在无菌实验室内用75％酒精的酒精消毒 30s，再用0.1％的升汞灭菌5-10分钟，用无菌水冲洗3次，滤纸吸干水分后备 用；