[发明专利]一种利用醛缩酶全细胞合成D-阿洛酮糖的方法有效
| 申请号： | 201410648577.3 | 申请日： | 2014-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN104611249B | 公开（公告）日： | 2019-06-11 |
| 发明（设计）人： | 孙媛霞;杨建刚;李季涛 | 申请（专利权）人： | 中国科学院天津工业生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N15/77;C12P19/02;C12R1/15 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300308 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 醛缩酶全 细胞 合成 阿洛酮糖 方法 | ||
1.谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)重组菌株SY12，保藏编号为CGMCCNo.9838。
2.一种构建权利要求1所述谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)重组菌株SY12 CGMCC No.9838的方法，具体方法包括以下步骤：
2.1构建携带L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶基因和果糖-1-磷酸化酶基因的载体pXFTY，具体方法为：PCR扩增来源于大肠杆菌MG1655如序列表中序列1所示的L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶(FucA)基因，如序列表中序列2所示的果糖-1-磷酸化酶(YqaB)基因、来源于pXMJ19如序列表中序列3所示的tac启动子，再以这三个基因为模板PCR扩增得到由这三个基因组成如序列表中序列4所示的融合基因FucA-tac-YqaB，然后将融合基因FucA-tac-YqaB连接入载体pXMJ19中，得到携带L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶基因和果糖-1-磷酸化酶基因的载体，命名为pXFTY，其核苷酸序列如序列表中序列6所示；
2.2向野生型谷氨酸棒杆菌ATCC 13032中导入携带L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶基因和果糖-1-磷酸化酶基因的载体pXFTY，得到携带有L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶基因和果糖-1-磷酸化酶基因的重组谷氨酸棒杆菌SY12。
3.权利要求1所述谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)重组菌株SY12 CGMCCNo.9838在合成D-阿洛酮糖中的应用，即在发酵培养基中添加D-甘油醛和葡萄糖，葡萄 糖通过胞内的糖酵解途径生成磷酸二羟丙酮，D-甘油醛和胞内积累的磷酸二羟丙酮(DHAP)在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)重组菌株SY12携带的L-墨角藻糖-1-磷酸醛缩酶和果糖-1-磷酸化酶的作用下合成单一产物D-阿洛酮糖。
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