[发明专利]一种鉴定或辅助鉴定细菌菌门的引物及其应用

权利要求书

1.一组用于鉴定或辅助鉴定待测样品中细菌菌门的引物，由如下(1)-(7)所示引物组成：

(1)如SEQ ID No.1中第59-75位核苷酸分子所示的正向引物；

(2)如SEQ ID No.2中第59-75位核苷酸分子所示的正向引物；

(3)如SEQ ID No.3中第59-75位核苷酸分子所示的正向引物；

(4)如SEQ ID No.4中第59-75位核苷酸分子所示的正向引物；

(5)如SEQ ID No.5中第59-75位核苷酸分子所示的正向引物；

(6)如SEQ ID No.6中第59-75位核苷酸分子所示的反向引物；

(7)如SEQ ID No.7中第59-75位核苷酸分子所示的反向引物。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，所述正向引物序列的5’端连接有adaptor序列；

所述正向引物序列的5’端连接的adaptor序列如SEQ ID No.1中第1-58位核苷酸分子所示或SEQ ID No.2中第1-58位核苷酸分子所示或SEQ ID No.3中第1-58位核苷酸分子所示或SEQ ID No.4中第1-58位核苷酸分子所示或SEQ ID No.5中第1-58位核苷酸分子所示。

3.根据权利要求1或2所述的引物，其特征在于，所述反向引物序列的5’端连接有adaptor序列；

所述反向引物序列的5’端连接的adaptor序列如SEQ ID No.6中第1-58位核苷酸分子所示或SEQ ID No.7中第1-58位核苷酸分子所示。

4.根据权利要求1-3任一所述的引物，其特征在于，所述反向引物中还包括barcode序列；

所述barcode序列加入的位置是反向引物中的adaptor序列的第24-25位核苷酸分子之间，不同的待测样品中加入不同的barcode序列。

5.一种用于鉴定或辅助鉴定待测样品中细菌菌种的试剂盒，该试剂盒包括权利要求1-4任一所述的引物。

6.权利要求5所述的试剂盒在制备鉴定或辅助鉴定待测样品中细菌菌门的产品中的应用。

7.一种鉴定或辅助鉴定待测样品中细菌菌门的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测样品中细菌基因组DNA；

(2)以步骤(1)中提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1-4任一所述的引物进行多重PCR扩增，得到扩增产物；

(3)利用IlluminaHiSeq2000测序平台对扩增产物进行双端150bp测序；

(4)对测序结果进行菌门分类，得到待测样品中存在的细菌菌门。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的细菌菌门包括：Actinobacteria，Bacteroidetes，Fusobacteria，Proteobacteria，Firmicutes，Aquificae，Caldiserica，Chlamydiae，Chlorobi，Chloroflexi，Chrysiogenetes，Deferribacteres，Deinococcus-Thermus，Elusimicrobia，Fibrobacteres，Gemmatimonadetes，Lentisphaerae，Marinimicrobia，Nitrospirae，Planctomycetes，Spirochaetes，Synergistetes，Tenericutes，Thermodesulfobacteria，Thermotogae，Parcubacteria，Microgenomates，SR1，CandidatusSaccharibacteria，Latescibacteria，Armatimonadetes，Verrucomicrobia，Omnitrophica，Poribacteria，Hydrogenedentes，Nitrospinae。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其特征在于：所述待测样品为含有细菌的样品；具体为人体肠道样本、动植物或环境；更具体为人粪便。

10.一种构建细菌高通量Illumina测序文库的方法，包括如下步骤：

(1)提取待测样品中细菌基因组DNA；

(2)以步骤(1)中提取的基因组DNA为模板，采用权利要求1-4任一所述的引物进行多重PCR扩增，得到的扩增产物即为所述细菌高通量Illumina测序文库；

或，权利要求10所述的方法在鉴定或辅助鉴定待测样品中细菌菌门中的应用。