[发明专利]一种重组副猪嗜血杆菌免疫保护性抗原PotD及其制备方法

权利要求书

1.一种如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

2.一种重组载体，其特征在于：包含SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于：所述的重组载体是重组pET28a质粒。

4.一种重组菌，其特征在于：它包含权利要求2或者3所述的重组载体。

5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于：所述的重组菌为重组大肠杆菌。

6.一种重组PotD蛋白，其特征在于：它由SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列编码。

7.根据权利要求6所述的重组PotD蛋白，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

8.一种制备权利要求6或7所述重组PotD蛋白的方法，其特征在于：包含如下步骤：

ⅰ、取权利要求5所述的重组大肠杆菌组菌，接种到添加有终浓度为50μg/ml的卡拉霉素的LB培养基上，37℃、280r/min摇床培养，至OD₆₀₀值达到0.5～0.6时，加入IPTG至终浓度为0.2～1.5mmol/L，25～42℃诱导表达1～7h；

ⅱ、离心，得菌体，裂解，取沉淀，分离纯化，即得。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤ⅰ中，IPTG的终浓度为1.0mmol/L；诱导表达的温度为30℃；诱导表达的时间为5h。

10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤ⅱ中，所述分离纯化的方法如下：取沉淀，用的包涵体洗涤液重悬，离心，弃上清，重复前述步骤2次，即可；其中，包涵体洗涤液包含如下浓度的成分：50mmol/L Tris－HCl，0.5mol/L NaCl，2mol/L尿素，2％Triton。