[发明专利]测定果汁中赭曲霉毒素A含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种赭曲霉毒素A含量的方法，具体涉及基于三维荧光二阶校正法测定果汁中赭曲霉毒素A含量的方法，属于食品安全领域。

技术背景

赭曲霉毒素A(OTA)是一种由真菌产生的有毒代谢产物，常见于谷物及其制品，咖啡，水果及其制品中，国际癌症研究机构(IARC)已将其确定为2B类致癌物。我国目前还没有果汁中赭曲霉毒素A的明确限量标准，尤其是其快速分析检测方法研究较少。

赭曲霉毒素A主要检测方法有薄层色谱法、酶联免疫法、免疫亲和柱层析净化荧光光度法和固相萃取高效液相色谱法、液液萃取净化高效液相色谱法等。赭曲霉毒素A结构中具有共轭双键，可以在紫外光照射下发出荧光，所以目前较为常用的检测方法是高效液相色谱荧光检测器法，但对多组分复杂基质化学体系进行分析时，必须先对体系样本组分进行物理或化学分离，然后再对目标分析物利用色谱柱的保留时间不同进行分析，这种处理方法通常会让整个分析过程变的繁琐，时间周期较长，并不适合企业生产中的低成本，大量样品快速检测的要求。

荧光分光光度法仪器相对成本较低，具有操作简单，检测速度快，灵敏度高等优点。但测定的是总发射荧光值，对复杂基质中单一物质测定选择性差，果汁中由于赭曲霉毒素A的荧光光谱与复杂样品基质的光谱混合重叠，因而未经分离直接用该方法检测其中赭曲霉毒素A含量的可行性较差，即常规荧光分析法难以满足分析要求。

将样品简单前处理纯化后经荧光光谱测定得到三维数据信息，结合化学计量学方法以“数学分离”结合“化学分离”以提高其选择性，可以在含有未知、未校正背景干扰和光谱严重重叠的情况下，实现对待测组分的直接快速定量测定，在食品质量安全等领域具有重要的分析潜力。

发明内容

本发明公开一种测定果汁中赭曲霉毒素A含量的方法，基于三维荧光二阶校正法，以数学分离结合化学分离来快速测定果汁中的赭曲霉毒素A含量的方法，旨在提供一种低成本、快速测定的方法。

本发明采用如下技术方案：

本发明采用激发—发射荧光矩阵(EEM)与平行因子法(PARAFAC)相结合，对样品简单处理后，分析果汁产品中赭曲霉毒素A含量。

一种测定果汁中赭曲霉毒素A含量的方法，包括如下步骤：

步骤(1)建立模型：基于平行因子法(PARAFAC)，配制赭曲霉毒素A校正样以建立定量分析的校正模型；

在线性范围内配制赭曲霉毒素A的校正样、验证样、果汁萃取液，并在优化后的扫描波长和扫描间隔下采集其三维激发-发射荧光光谱数据，以避免瑞利散射、拉曼散射的干扰，减少冗余光谱区域和信噪比很低的光谱区域的干扰；对所得到三维数据阵采用平行因子法进行数学分离解析，并建立校正模型；

步骤(2)验证模型：以赭曲霉毒素A验证样对所建校正模型进行判断，并验证校正模型的可靠性；

以与校正样相同的处理方法配制验证样，并经荧光扫描采集三维荧光数据，经平行因子法分析，校正模型预测后得预测浓度，并与理论浓度比较分析以判断模型的可靠性；

步骤(3)分析测定：以校正模型对果汁实际样品中赭曲霉毒素A的含量快速分析测定；

以不同品种的果汁为实际样品，果汁实际样品经过液液萃取前处理后，在相同的实验参数下采集三维荧光光谱数据阵，经数学分离和校正模型预测得到实际样品中赭曲霉毒素A的含量。

在上述技术方案基础上，进一步，

所述步骤(1)中，赭曲霉毒素A校正样线性范围为：0.27～3.24ng/mL；

所述步骤(1)中，优化好的扫描波长和扫描间隔：激发波长范围为285～360nm，扫描间隔5nm；发射波长范围为420～510nm，扫描间隔5nm；

所述步骤(2)中，对模型进行验证的赭曲霉毒素A验证样溶液配制的浓度范围为：0.44～2.18ng/mL；

所述步骤(3)中果汁实际样品的加标浓度为：0～8.89ng/mL，保证萃取之后的浓度在线性范围之内；

所述步骤(3)中液液萃取前处理步骤为：果汁实际样品经二氯甲烷液液萃取，离心分层，取二氯甲烷相经稀碳酸氢钠溶液反萃，离心分层后，取上层水相，加盐酸酸化，除气泡并保存待测。空白实验为未加标的果汁样品。

测定果汁中赭曲霉毒素A含量方法的性能评价：