[发明专利]一种基于qRT-PCR技术检测储良龙眼果实成熟度的方法

权利要求书

1.一种基于qRT-PCR技术检测储良龙眼果实成熟度的方法，其特征在于：选取花谢

后的储良龙眼果实做好标记，在成熟期前后，连续测定果实蔗糖磷酸合成酶sucrose phosphate synthase SPS基因的表达水平的变化规律，选取较高的SPS基因表达水平范围作为最佳采摘期。

2.根据权利要求1所述的一种基于qRT-PCR技术检测储良龙眼果实成熟度的方法，其特征在于：所述的连续测定果实蔗糖磷酸合成酶SPS基因的表达水平的变化规律包括如下步骤：

A．“储良”龙眼果实成熟过程中糖组分积累变化规律的分析：通过测定糖组分，发现在储良龙眼果实成熟过程中，蔗糖的含量远远高于果糖和葡萄糖；在果实成熟过程中，蔗糖的含量逐渐升高，达到最高点之后成下降趋势；

B．“储良”龙眼果实成熟过程中糖代谢相关酶活性变化规律的分析：对与糖代谢相关的酶主要是蔗糖磷酸合成酶sucrose phosphate synthase：SPS、蔗糖合成酶sucrose synthase：SS-s、转化酶invertase：Ivr，其中转化酶又分为酸性转化酶acid invertase：AI和中性转化酶neutral invertase：NI进行分析，得出在储良龙眼果实成熟过程中，SPS酶活性远远高于其他酶的活性，酶活性也逐渐升高，达到最高点后略有下降；

C．糖代谢酶活性与糖积累的相关性分析：在“储良”龙眼成熟过程中，SPS酶活性与蔗糖积累成极显著的正相关；

D．SPS基因的克隆：对SPS基因进行RT-PCR，重复两次，在龙眼果实总RNA中稳定扩增出一条约为360bp左右的目的条带；根据3’和5’端扩增后测序结果设计特异引物进行全长基因克隆，回收RT-PCR的cDNA特异片段，与pGEM-T easy载体连接，转化到大肠杆菌感受态细胞中；挑取阳性克隆进行酶切验证后，测序；

E．SPS基因在“储良”龙眼果实成熟过程中的表达水平分析：在“储良”龙眼品质形成过程中，SPS基因表达量逐渐增多，达到最大值后下降，与果实成熟度成显著正相关。

3.根据权利要求1所述的一种基于qRT-PCR技术检测储良龙眼果实成熟度的方法，其特征在于：所述的成熟期前后，为花谢后105 ~ 120天。

4.根据权利要求1所述的一种基于qRT-PCR技术检测储良龙眼果实成熟度的方法，其特征在于：所述的较高的SPS基因表达水平范围，为SPS基因表达量最高值±0.3039。