[发明专利]一种精氨酸双糖苷的合成方法及其在抗衰老中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种精氨酸双糖苷（AFG）的合成方法及其在抗衰老方面的应用。

背景技术

    精氨酸双糖苷(AFG)是人参炮制过程中，鲜人参在烘干阶段麦芽糖与精氨酸发生羰醛缩和反应经Amadori重排生成。研究发现AFG不仅具有促进微循环^[1]、扩张血管^[2]和治疗糖尿病^[3]等药理活性，还可促进皮肤胶原蛋白合成而提高皮肤弹性^[4]。文献中记载AFG合成途径为^[5]：无水冰乙酸环境下，精氨酸和麦芽糖质量比为1:2, 80℃反应0.5h~1.0h，合成率约为27%，且粗合成物具有强烈刺激性酸味，因此，有必要寻找一种合成率高、无刺激性气味的合成方法。

    伴随着世界老龄化趋势的发展和工作生活压力的增大，疾病性衰老和亚健康性衰老也日趋明显。除基因片段缺失和突变^[6-7]外，氧化应激损伤^[8,9,10]是导致衰老的最主要的原因。本实验探讨AFG对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老的抑制作用，根据AFG在大鼠体内的药代动力学^[11]可知，AFG在机体内的主要代谢部位为肝脏，也可通过血脑屏障作用于大脑，因此依据衰老小鼠机体生化指标变化，通过检测AFG给药组小鼠肝脏和脑组织中抗氧化能力的改变来判断其对衰老小鼠体内氧化应激损伤的修复能力。

本发明内容

  AFG合成方法：精氨酸和麦芽糖以无水热稳定溶剂为反应媒介，固体有机酸为催化剂，加热和混匀条件下生成精氨酸双糖苷（AFG）。

  本发明对D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型造模部位及其最佳造模剂量进行优化，得出：D-半乳糖致小鼠亚急性衰老模型造模时颈背部皮下注射法（SC）优于腹腔注射法(IP)，且其最佳造模剂量分别为0.5g/kg和2.5g/kg。

  通过体内实验揭示AFG(50mg/kg)，可显著提高衰老小鼠的脑指数、脑组织总抗氧化能力和皮肤中羟脯氨酸含量,显著降低了脑组织中丙二醛和一氧化氮含量，有效治疗衰老；

  通过体内实验揭示AFG(30mg/kg)预防给药可减缓小鼠衰老症状，提高小鼠胸腺指数、皮肤中羟脯氨酸含量、血清中超氧化物歧化酶水平、脑组织总抗氧化能力和肝脏中过氧化氢酶水平，能有效预防衰老。

本发明的积极效果在于：

本发明中AFG的合成方法，合成率有大幅提高，可达79%，同时降低了AFG的生产成本，且粗合成物无刺激性气味，合成所用酸性物质为常用食品添加剂，丙三醇亦为食品和化妆品添加剂，对人体均无毒无刺激性，增加了AFG粗合成物的使用安全性，合成率的提高加快了AFG走向工业化的步伐。

本发明经过预实验探讨出D-半乳糖致小鼠亚急性衰老最佳造模部位及其最佳造模剂量，提高了研究抗衰药物的科学性揭示出AFG具有提高机体总抗氧化能力，显著修复机体的氧化应激损伤，提高衰老机体脑指数和胸腺指数，提高皮肤弹性，整体表现抗衰老作用。

实验例一  AFG的合成与检测

1.AFG的合成

1.1精确称量1.0g精氨酸、2.0g麦芽糖和0.75g柠檬酸，置于20ml无水丙三醇中，混匀条件下加热至85℃，反应2.5h~3.0h后冷却，稀释后检测粗合成中AFG浓度。

1.2 精确称量反应底物（1.0g精氨酸+2.0g麦芽糖）4份，均放于20ml丙三醇中，依次加入1.5g、1.0g、0.75g和0.5g柠檬酸，加热至85℃，反应2.5h后冷却。粗合成物稀释后检测AFG浓度。

1.3精确称量反应底物（1.0g精氨酸+2.0g麦芽糖）加入柠檬酸0.5g，混匀加热至85℃反应2.5h冷却，粗合成物稀释后检测AFG合成率变化。 

1.4设定空白对照组：0.75g柠檬酸与20ml丙三醇85℃反应2.5h。

1.5 其它固体有机酸（苹果酸，苯甲酸和草酸等）催化AFG合成反应，方法同本专利1.1。

2.AFG粗合成物的检测

   运用柱前衍生高效液相色谱法^[5]，以空白组（丙三醇20ml+柠檬酸0.75g，85℃反应2.5h）和AFG标品为空白和对照，检测和计算粗合成物中AFG的生成率。）