[发明专利]降钙素原检测方法与检测装置、以及检测材料的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及降钙素原的检测，尤其涉及的是，一种降钙素原的检测方法与检测装置、以及一种降钙素原检测材料的制备方法。

背景技术

降钙素原(PCT)的检测，通常采用胶体金检测技术，目前市场上有此类的产品出现，但是检测灵敏度都在0.5ng/mL左右。例如，其检测的方法原理是，用一株特异性的降钙素原单抗偶联到烧制好的胶体金颗粒上面，并将其铺到金标垫上烘干，用另一株特异性的降钙素原单抗包被到NC膜上。当含有PCT的样本加入加样孔后，样本中的PCT与偶联到胶体金颗粒上的鼠抗PCT单克隆抗体结合，形成胶体金-抗体-抗原的复合物，该免疫复合物再沿着硝酸纤维素膜层析至检测区(T)，与预包被的鼠抗PCT单抗结合，在检测区呈现紫红色的反应线，其呈色深浅与样本中的PCT含量成正比。

现有技术方案通常采用以下步骤实现。

第一、胶体金纳米颗粒的烧制：用万分之四浓度的氯金酸溶液加入适量的还原剂，这样氯金酸被还原生成一定大小的胶体金纳米颗粒。胶体金纳米颗粒的大小和均一性对实验的结果影响非常大，主要是对灵敏度和测试的重复性的影响。

第二、胶体金纳米颗粒的标记：把一定浓度的降钙素原抗体偶联到胶体金颗粒上面。其偶联的条件和偶联的效率，会直接影响试剂检测PCT的性能---灵敏度。

第三、喷金、干燥：把标记好的胶体金纳米颗粒均匀喷在玻璃纤维上面，并用烘干或者冻干的方式将其干燥。

第四、包被：将一定浓度的降钙素原抗体用点膜仪均匀的在硝酸纤维素膜上划线，然后放入干燥箱干燥2-4小时。这个过程就是将抗体包被到硝酸纤维素膜上面的过程。

第五、组装：将样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水纸按照一定顺序贴在PVC板上面。贴好后，切条装卡，然后装袋封口。

例如，中国专利200510061471.4公开了降钙素原(PCT)的制备方法属于医药和生物工程技术领域，涉及一种临床上可以快速准确反应炎症指标的多肽PCT的制备方法，发明采用PCT cDNA以基因工程方法制备含116个氨基酸残基的PCT。用PCR技术将表达PCT的目的基因扩增，纯化其产物，将纯化的PCR产物予BamH I与Hind III双酶切后定向插入经同样双酶切的pet41a，获得重组质粒，再将测序正确的重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)，经培养扩增，抽提纯化，镍柱收集目标峰，真空冷冻干燥。本发明方法获得的降钙素原得率高、成本低，可以为制备临床诊断试剂提供大量的原材料。

又如，中国专利201080016842.6公开了用于检测降钙素原的免疫测定法，其涉及用于在源自于从对象获得的体液的生物样品中检测降钙素原或其长度为至少20个氨基酸残基的片段的体外方法，所述方法包含下列步骤：(i)将所述样品与针对降钙素原不同表位的至少两种抗体或其功能片段相接触，以及(ii)定性或定量检测所述至少两种抗体与降钙素原或其所述片段的结合，其中结合指示了所述样品中降钙素原或所述片段的存在或浓度，其中至少一种抗体或其功能片段针对包含在跨越降钙素原的第2至52位氨基酸残基的序列中的表位。该发明还涉及针对降钙素原的N-末端表位的抗体以及包含针对PCT的抗体的试剂盒。

又如，中国专利201210464257.3涉及一种检测技术领域的多抗体标记的降钙素原快速检测试剂盒，所述试剂盒包含常规载体以及固定在所述常规载体上的对应降钙素原不同区域的单克隆或多克隆的捕获抗体；以及与所述的捕获抗体配伍的，以合适标记物标记的多个针对降钙素原相同或不同区域的单克隆或多克隆抗体。本发明的多抗体标记的降钙素原快速检测试剂盒，通过标记与包被多抗体对的不同识别区域及空间配伍，能够最大限度地捕捉样本中降钙素原，提高检测灵敏度；该发明的试剂盒将PCT的检测灵敏度提高至0.1ng/ml(实质上是0.2ng/ml)，拓展了PCT快速检测试剂在细菌性感染诊断、鉴别诊断及治疗中的应用价值及范围，可用于细菌性感染的诊断、鉴别诊断、治疗疗效监测及预后评估。

但是，现在技术存在以下问题：胶体金纳米颗粒的制作过程不易控制，颗粒的均一性不能得到保证，从而影响试剂卡的重复性；并且，胶体金颗粒的偶联效率偏低，导致灵敏度也会偏低，市场上产品的灵敏度多数在0.5ng/mL左右，较好的产品在0.2ng/mL左右。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种新的降钙素原的检测方法与检测装置、以及一种降钙素原检测材料的制备方法。