[发明专利]快速检测微小核糖核酸的检测卡及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种快速检测微小核糖核酸的检测卡，包括依次相连的样品垫，纳米材料垫，硝酸纤维素膜和吸收垫，其特征在于，所述硝酸纤维素膜即为检测卡基体，所述检测卡基体上分布有进样区、空白对照区及样本检测区，所述进样区与样本检测区连通，所述空白对照区及样本检测区均修饰有具有与待测miRNA互补的miRNA序列的探针，所述探针一端与检测卡基体连接，所述探针另一端携带有荧光基团。

2.根据权利要求1所述的快速检测微小核糖核酸的检测卡，其特征在于，所述待测miRNA的序列包括miR-21、miR-24、miR-25、miR-30a、miR-100、miR-126、miR-143、miR-145、miR-152、miR-155、miR-183、miR-188、miR-189、miR-200b、miR-320、miR-331中的任一种或两种以上的组合。

3.根据权利要求1所述的快速检测微小核糖核酸的检测卡，其特征在于，所述检测卡有1组～10组空白对照区和样本检测区。

4.根据权利要求1所述的快速检测微小核糖核酸的检测卡，其特征在于，所述荧光基团为Cy3或Cy5。

5.权利要求1～4任一项所述的快速检测微小核糖核酸的检测卡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)合成含有miRNA的探针，首先在miRNA一端修饰由5至20个碳原子组成的碳链，在另一端修饰荧光基团，然后合成得到探针；

2)在硝酸纤维素膜表面即检测卡基体上限定一组空白对照区以及样本检测区，将含有浓度为10ng/L～1mg/L的步骤1)所述探针的溶液喷涂至空白对照区及样本检测区，并于温度为37℃的条件下保持1h以上；

3)将步骤2)修饰完成的硝酸纤维素膜切割成合适尺寸，然后与样品垫、纳米材料垫和吸收垫组装成检测卡。

6.一种快速检测微小核糖核酸的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-4中任一项所述的检测卡和金纳米颗粒标记的miRNA，所述金纳米颗粒标记的miRNA具有与待测miRNA相同的序列。

7.根据权利要求6所述的快速检测微小核糖核酸的试剂盒，其特征在于，所述金纳米颗粒标记的miRNA中，miRNA共价连接于金纳米颗粒表面，所述金纳米颗粒的粒径为5nm～50nm。

8.权利要求1～4中任一项所述的检测卡、权利要求6～7任一项所述的试剂盒在检测微小核糖核酸中的应用。

9.权利要求8所述的应用，其特征在于，将包含有待测miRNA的样本与金纳米颗粒标记miRNA的混合溶液共同滴加至检测卡的进样区，并使所述混合溶液定向流动至样本检测区，与固定在样本检测区的探针结合；检测样本检测区及空白对照区的荧光强度；空白对照区作为质控，根据样本检测区的荧光强度从而获知样本中的待测miRNA浓度。

10.权利要求9所述的应用，其特征在于，将样本加入检测卡后，保持15min～60min再进行荧光强度测量，检测温度为20℃～50℃。