[发明专利]极化CD4+T细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种极化CD4+T细胞的方法。

背景技术

Th细胞极化是一个多信号参与的复杂过程，如TCR活化信号、辅助受体以及细胞因子、趋化因子等，对其相关研究已逐步深入到转录因子、信号转导、基因调控水平。国内外己有较多研究探讨单一细胞因子或趋化因子对Th细胞极化的调节机制。己有研究表明，外源性IL-2或IL-4可使CD4+T前体细胞向Thl或Th2细胞极化，其信号转导通路的激发有赖结合于受体胞内域的非受体型蛋白酪氨酸激酶(Syk、ZAP70等)。CXCR4是Thl细胞和Th2细胞均表达的趋化因子受体，其配体为SDF-lα(基质细胞源因子)(或CXCL12)，二者结合不仅可促T细胞迁移，还可提供T细胞共刺激和极化信号。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的极化CD4+T细胞的方法。

实现上述目的的技术方案如下。

一种极化CD4+T细胞的方法，包括以下步骤：

得到CD4+T细胞；

进行培养时，加入SDF-1α和rhIL-2，刺激CD4+T细胞，培养1—8天，CD4+T细胞向Th1方向极化。

或者，包括以下步骤：

得到CD4+T细胞；

进行培养时，加入SDF-1α和IL-4，刺激CD4+T细胞，培养1—8天，CD4+T细胞向Th2方向极化。

在其中一个实施例中，进行培养时CD4+T细胞细胞密度为2x10⁹/L，0.5ml/孔，所述SDF-1α的加入量为50-100ng，所述rhIL-2的加入量为5-10ng。

在其中一个实施例中，进行培养时CD4+T细胞细胞密度为2x10⁹/L，0.5ml/孔，所述SDF-1α的加入量为50-100ng，所述rhIL-4的加入量为5-10ng。

本发明的发明人通过长期的实验研究积累，发现通过联合细胞因子和趋化因子协同作用使Th细胞进行极化。以往的研究表明，外源性IL-2可使CD4+T前体细胞向Th1细胞极化；外源性IL-4可使CD4+T前体细胞向Th2细胞极化。SDF-1α可提供T细胞共刺激和极化信号。但单一细胞因子或趋化因子并不代表整个机体免疫网络，仅能作为其中一部分，细胞因子和趋化因子间也存在交互作用。而本发明人发现，单纯使用IL-2或者IL-4极化CD4+T前体细胞不能提供其所需的共刺激和极化信号，因此联合细胞因子和趋化因子共同调节Th细胞极化具有重要意义，通过二者联合使用，可以使CD4+T前体细胞表达趋化因子受体，并与其配体SDF-1α结合，从而顺利完成极化过程。

附图说明

图1为实时定量RT-PCR检测细胞IFN-γmRNA(A)和IL-4mRNA(B)表达，其中图A.圆形：标准DNA模板

三角形：resting CB CD4+T细胞

菱形：经IL-2(10ug/L)和SDF-1α(100ug/L)刺激的细胞

方形：经IL-4(10ug/L)和SDF-1α(100ug/L)刺激的细胞

图B.圆形：标准DNA模板

方形：resting CB CD4+T细胞

菱形：经IL-2(10ug/L)和SDF-1α(100ug/L)刺激的细胞

三角形：经IL-4(10ug/L)和SDF-1α(100ug/L)/CXCL12刺激的细胞；

图2为IL-2/IL-4和SDF-1α协同诱导CD4+T细胞Syk和ZAR70的磷酸化。

具体实施方式

实施例1

1.CD4+T细胞的获得

1.1取新鲜脐带血(肝素抗凝20u/ml)+生理盐水照1：1稀释；

1.2在50ml离心管中预先加入淋巴细胞分离液15ml，再加入稀释好的脐带血25ml；

1.3小心的将稀释后的血液加到分离液的上面；

1.4离心：转速：1500r/min，温度20℃－28℃，时间：20min；

1.5离心管内顺次为血浆---单个核细胞层－－分离液－－红细胞；

1.6用移液管吸出单个核细胞层，重悬于2-5倍体积的生理盐水中；

1.7离心：转速：2000－2300r/min，时间：10min，温度：4℃；

1.8离心后，弃上清液，细胞沉淀重悬于1ml完全培养基中(含10％FCS的RPM-1640培养液)。