[发明专利]一种蝶豆的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，具体的是一种蝶豆的组织培养方法。

背景技术

蝶豆(Clitoria ternatea L.)，又名蓝蝴蝶，蓝花豆，蝴蝶花豆，系蝶形花科(Papilionaceae)蝶豆属(Clitoria)植物，原产印度、印度尼西亚等地，在世界热带和亚热带地区广泛栽培。蝶豆具有广泛的经济价值，花可提取天然染料；嫩夹可食用；根可入药；此外，蝶豆还可调制成干草，用作饲料，尤其是近年来蝶豆作为庭园观赏植物，广泛用于园林植物造景配置中。

目前关于蝶豆的研究极少，国内的研究领域主要涉及一些特性的简单描述，以及种子萌发和栽培技术的研究。蝶豆种子的发芽率普遍较低，采用常规的种子繁殖方法速度慢。组织培养技术具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，能保持原有品种的优良性状，不受季节的限制等优点，已广泛应用各种观赏植物中，目前尚未见有应用于蝶豆上。

发明内容

本发明的目的是提供一种蝶豆的组织培养方法，解决了蝶豆因种子发芽率较低而繁殖速度慢的问题。本发明的方法用于蝶豆快速繁殖，具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，移栽成活率高的优点。

本发明所提供的技术方案是：

一种蝶豆的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)种子无菌萌发：选用饱满的蝶豆种子，经自来水冲洗、酒精灭菌、无菌水冲洗、升汞灭菌、无菌水冲洗和催芽处理，然后播种，种子萌发出小苗；

(2)初代培养；将种子萌发后小苗的下胚轴切成长为5-10mm的小段，然后接种在改良MS培养基上，得到愈伤组织；

(3)愈伤组织分化：将获得的愈伤组织切成0.5cm×0.5cm的小块，然后接种在含有6-BA和NAA的改良MS培养基上，得到组培小苗；

(4)生根培养：当组培小苗长至高约2.0-4.0cm时，转接在含有IBA的改良MS培养基或者含有IBA的改良1/2MS培养基上，得到生根组培苗；

(5)炼苗及移栽：将生根组培苗置于室温下炼苗1d，然后除去瓶盖再炼苗1-2d，洗去残余培养基，并将生根组培苗用50％多菌灵可湿性粉剂稀释800-1000倍或者0.5％高锰酸钾溶液浸泡10min后移栽至基质中。

其中，步骤(1)中所述播种，是将种子接入改良MS培养基中或播入经过灭菌处理保持湿润的沙子中。

其中，步骤(2)中所述改良MS培养基：是将MS培养基中的大量元素增加至20倍，以6.7g/L的无水CaCl₂替代8.8g/L的CaCl₂·2H₂O，将MS培养基中的微量元素增加至200倍，以0.0032g/L的CuSO₄替代0.005g/L的CuSO₄·5H₂O，MnSO₄·4H₂O的用量改为为3.38g/L，并以自来水替代去离子水，蔗糖为20g/L，琼脂3.5-4.0g/L，其余成分及用量不变，PH值为5.8-6.0。

其中，步骤(3)中所述含有不同浓度6-BA和NAA的改良MS培养基为MS+6-BA0.1-1.0mg/L+NAA0.01-0.1mg/L。

其中，步骤(4)中所述所述改良1/2MS培养基：是在步骤(2)所述的改良MS培养基的基础上，将大量元素减至改良MS培养基中的1/2，蔗糖为10g/L，其余成分及用量与改良MS保持一致；所述含有IBA的改良MS培养基为MS+IBA0.1-0.3mg/L；所述含有IBA的改良1/2MS培养基为1/2MS+IBA0.1-0.3mg/L。

其中，步骤(4)中所述生根组培苗，为真叶已长出，主根约有3-4条，根长约为2.5-4.5cm的苗。

其中，步骤(5)中所述移栽，是将生根组培苗移栽至50-72孔育苗穴盘中，穴盘的尺寸为540mm×280mm，该穴盘中装有基质。

作为优选，所述基质是由按体积比泥炭：珍珠岩＝2:1所组成，其PH值为6.0-7.0。

作为优选，所述基质在移栽前1周需要用800-1000倍的多菌灵可湿性粉剂稀释液或0.5％高锰酸钾溶液进行消毒。

本发明的有益效果

本发明的方法用于蝶豆组织培养，具有繁殖速度快、繁殖系数大，繁殖后代整齐一致，移栽成活率高的优点。

具体实施方式