[发明专利]分泌抗烟草花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗烟草花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

背景技术

烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus ，TMV)是植病毒中较重要的病毒之一．也是烟草花叶病毒属的模式种。它是一种RNA病毒，病毒粒体为棒状，长度为300～310 nm、直径18 nm；TMV基因组为单链正义RNA，病毒基因组长6.3～6.6kb，其基因组5’端含有帽子结构，有70个核苷酸左右的非编码区(UTR)；3’端的UTR长200～400nt，能折叠成类似tRNA状结构。基因组至少编码4种蛋白，靠5’端的124~132kDa及181～189kDa两个蛋白与病毒的复制有关，其中181～189kDa蛋白是由124～132kDa蛋白终止子通读产生。另外两个蛋白分别为28～31lkDa的移动蛋白(MP)和17~18kDa的外壳蛋白(CP)，这两个蛋白分别 由不同的亚基因组RNA表达产生。

TMV的寄主范围非常广，可侵染十字花科、茄科、菊科、藜科及苋科等36科150多个属350种植物，包括烟草、番茄、茄子、辣椒、菠菜等，导致烟草和番茄等作物的严重危害。全世界每年因TMV而造成的经损失就超过l亿美元。烟草业在我国经济中占据着重要的地位，而烟草花叶病严重危害烟叶的产量和质量，成为影响优质烟叶生产的关键因素，使烟叶出口所面临的挑战，同时给我国造成巨大的经济损失。不同条件下同种病毒的症表现状有很大差异，而不同病毒在烟叶上表现为相似的症状，因此建立烟草花叶病毒病检测体系对于烟叶病毒病的防治有重要意义。

为了掌握烟草花叶病毒（TMV）病害在我国的发病危害状况，强化我国烟草花叶病毒病早期监测和预警，科学指导防控，急需建立检测烟草花叶病毒病的高通量检测方法，而目前没有这种高通量的检测方法，仅用低效率的电镜观察、RT-PCR方法、核酸电泳等方法进行小样本检测。本发明提纯的TMV病毒为抗原通过杂交瘤技术制备了1株分泌抗TMV的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞3A7，以制备的单抗为核心可建立检测TMV的高通量的血清学方法及其试剂盒，从而为我国烟草花叶病毒病检测、早期监测和预警、科学指导防控提供物质和技术支持。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种分泌抗烟草花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。

分泌抗烟草花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株3A7，它能分泌抗烟草花叶病毒的特异性单克隆抗体, 杂交瘤细胞株3A7于2014年7月3日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No. 9338。

抗烟草花叶病毒的单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-8，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链，该单克隆抗体能与烟草花叶病毒的衣壳蛋白有特异性免疫结合反应，该单克隆抗体检测病叶的灵敏度达到1:81920倍稀释。

抗烟草花叶病毒的单克隆抗体仅与烟草花叶病毒有特异性免疫反应，而与番茄花叶病毒、齿兰环斑病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、小西葫芦黄化花叶病毒、黄瓜花叶病毒、瓜类褪绿黄化病毒、菜豆普通花叶病毒、水稻黑条矮缩病毒、芜菁花叶病毒、马铃薯X病毒、马铃薯Y病毒、马铃薯A病毒、马铃薯S病毒、油菜花叶病毒、番茄斑萎病毒、建兰花叶病毒均不发生免疫反应。

抗烟草花叶病毒单克隆抗体在抗烟草花叶病毒检测上的应用是以单克隆抗体为核心建立的各种免疫学检测方法和免疫学试剂盒。

本发明与现有技术相比具有的有益效果：1）提供的杂交瘤细胞株3A7分泌抗烟草花叶病毒特异性单克隆抗体，以该单抗为核心建立的dot-ELISA和ACP-ELISA等免疫学方法及用这些方法建立的试剂盒能高度特异、准确、灵敏的检测烟草花叶病毒；2）利用本发明所制备的单克隆抗体检测烟草花叶病毒，不需要昂贵的电子显微镜、PCR仪等设备；3）利用本发明所制备的单克隆抗体，可有效地用于田间作物中的烟草花叶病毒的检测。

附图说明

图1是dot-ELISA方法检测TMV的灵敏度分析。

具体实施方式

分泌抗烟草花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株3A7于2014年7月3日保藏于中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编：100101，保藏号为CGMCC No. 9338，它能分泌抗烟草花叶病毒的单克隆抗体。