[发明专利]一个软质、抗白粉病普通小麦-簇毛麦易位系的选育、鉴定方法

权利要求书

1.一种软质、抗白粉病普通小麦-簇毛麦T5VS·5AL易位系NAU421的选育方法，其特征在于将中国春突变体CSph1bph1b与普通小麦-簇毛麦5V染色体异附加系DA5V进行杂交，再用中国春突变体CSph1bph1b进行回交获得BC₁；种植BC₁种子，利用分子标记CINAU41的引物对苗期DNA进行鉴定，鉴定出含有5V染色体的单株；对含有5V染色体的单株再利用ph1b基因特异分子标记ABC302.3的引物进行ph1b隐性纯合体筛选，获得含有外源染色体5V且ph1bph1b纯合单株；将含有外源染色体5V且ph1bph1b纯合体的植株进行花粉母细胞减数分裂中期Ⅰ染色体配对观察，统计外源染色体与小麦染色体配对频率，将含有部分同源染色体配对的植株套袋自交，获得BC₁F₁，将BC₁F₁种子在培养皿中发芽，分单株剪取根尖进行荧光原位杂交鉴定，分单株提取DNA，利用5VS特异分子标记CINAU41，进行PCR鉴定，对鉴定出涉及5VS的易位系单株套袋自交获得BC₁F₂种子；将BC₁F₂种子种植于温室大棚并提取BC₁F₂单株DNA，再次应用CINAU41的引物对单株DNA进行PCR扩增，经电泳检测，有745bp特异条带的单株表明含有5VS染色体臂,然后再利用5AS特异分子标记Xgwm443的引物对含有5VS染色体臂的单株DNA进行PCR扩增，经电泳检测，扩增不出245bp特异条带的单株表明缺少5AS染色体，即为纯合的T5VS·5AL易位系。

2.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于所述的方法还包含对纯合的T5VS·5AL易位系单株套袋自交，获得BC₁F_2:3；将BC₁F_2:3种子在培养皿中发芽，分单株剪取根尖依次进行细胞学鉴定，进一步确定易位染色体的身份。

3.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于所述的分子标记CINAU41的引物为CINAU41F：SEQ ID NO.1，CINAU41R:SEQ ID NO.2；所述的分子标记ABC302.3的引物为ABC302.3F：SEQ ID NO.3，ABC302.3R:SEQ ID NO.4；所述的5AS特异分子标记Xgwm443的引物为：Xgwm443F:SEQ ID NO.5，Xgwm443R:SEQ ID NO.6。

4.根据权利要求1所述的选育方法，其特征在于所述的细胞学鉴定包括C-分带和分子原位杂交：利用荧光原位杂交对CS ph1b BC₁单株进行花粉母细胞中期Ⅰ观察，绿色信号为簇毛麦5V染色体，红色信号为小麦染色体若形成的二价体中既有绿色信号又有红色信号，表明簇毛麦5V染色体与小麦染色体间发生了同源染色体配对；簇毛麦5VS染色体臂有强的末端C-分带带纹特征，小麦5AL染色体臂有强的中间C-分带带纹特征，根据这些特征，对BC₁F_2:3代获得的易位系材料依次进行C-分带检测和荧光原位杂交检测，若易位染色体的短臂是绿色信号且具有强的末端C-分带带纹特征，长臂为红色信号且有强的中间C-分带带纹特征，表明该易位系为T5VS·5AL染色体易位系。

5.用于追踪权利要求1所述普通小麦-簇毛麦T5VS·5AL易位系NAU421的1个共显性分子标记Xcinau5VS-1，其特征在于该分子标记引物为XCINAU5VS-1F:SEQ ID NO.7，XCINAU5VS-1R:SEQ ID NO.8；利用该分子标记引物对T5VS·5AL染色体易位系进行PCR扩增，能够扩增出5VS 700bp的特异条带，而缺少小麦5AS 750bp的特异条带。

6.权利要求5所述的分子标记Xcinau5VS-1在分子标记辅助选择育种中的应用。