[发明专利]一种稀少精子冷冻保护剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及精子保存技术领域，具体地说，涉及一种稀少精子冷冻保护剂及其应用。

背景技术

随着现代文明进步与社会工业化发展，环境污染愈加严重，精液异常增多，导致不育症的发病率已达到10%，成为常见疾病。1992年，卵胞浆内单精子显微注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）技术的出现为不育症患者带来了福音。严重男性不育症患者，如严重少、弱精子症即精子密度＜（1～5）× 10⁶/ mL（每个高倍视野(high power field，HPF)1 ～5 条）、梗阻性无精子症及非梗阻性无精子症患者，可通过手术获取睾丸或附睾精子，虽然所得精子数量较少，但均可通过 ICSI 技术生育子代。

稀少精子冷冻保存主要是针对临床上常见的少、弱精症或无精症患者通过睾丸、附睾活检获得数量极少的精子进行冷冻保存，在女方需要接受辅助生殖技术治疗时，确保在取卵当天有可使用的精子是整个治疗过程中的重要环节，可以将这些事先已冷冻保存的精子复苏后进行卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）而获得子代，医学上称之为“生殖保险”。

目前每个ICSI治疗周期的妊娠率在40%～45%，那么部分患者有可能需要重复多次ICSI治疗。如果没有在术前对其丈夫稀少精子进行冻存，则每个周期治疗都需进行睾丸、附睾活检。少精症患者的精子不稳定，也有可能得不到精子以致取消治疗周期。睾丸、附睾活检是创伤性手术，多次反复操作不仅给患者带来心理压力和经济负担，而且还可能造成睾丸、附睾组织纤维化，导致不可逆的睾丸萎缩、生精功能退化，甚至内分泌功能丧失而需要外源性睾酮替代治疗。如果能在术前将获得的精液中少量精子或睾丸、附睾活检得到的数量有限的精子进行冻存，则可以保证这类患者使用辅助生殖技术的安全性，故稀少精子的成功冻融意义非常重大。

由于临床上来源于各种类别的稀少精子的数量很少，质量也不好，尤其通过显微外科手术获取的睾丸组织的精子，显微镜下观察这部分精子的运动是非常微弱的，且精子细胞膜尚未完全成熟，精子核DNA的稳定性也较差，如果按照传统的冷冻保护剂方法去冷冻这部分精子，冷冻过程中因温度下降及细胞内冰晶形成等因素会导致一定程度的精子损伤，如冰晶形成引起的细胞结构机械损伤、渗透压急剧改变、局部活性氧含量的迅速升高都可损伤精子的质膜、鞭毛、线粒体、顶体、细胞核等细胞器的结构与功能，影响精子的存活率、活力、形态、受精能力及所携带的遗传物质的完整性，甚至诱发精子的凋亡。由于本来精子运动能力就很弱，复苏以后就更不易找到活动的精子。事实表明采用常规精液标本那样的冷冻保存办法来冻融临床的稀少精子已被证明效果很差，引起的精子损伤可降低辅助生殖技术的受精率、妊娠率，提高流产率。因此，如何降低冷冻对精子的损伤，尤其是对少精、弱精子及睾丸获取的精子冷冻保存是这项技术中最难以突破的瓶颈。

中国专利文献CN201310172542.2，公开日2014.10.15，公开了一种精子冷冻保护剂，包括体积比为5∶1∶1的无菌去离子水、新鲜卵黄与甘油，还包括枸橼酸钠、葡萄糖、果糖、咖啡因与环糊精，其质量配比关系为：新鲜卵黄0.2mg/ml、甘油0.15mg/ml、枸橼酸钠13mg/ml、葡萄糖10mg/ml、果糖5mg/ml、咖啡因1mg/ml与环糊精1mg/ml。其配置方法如下所述：首先，用容器盛装100ml无菌离子水。接着，依次先后加入1.22g枸橼酸钠、0.78g葡萄糖、0.68g果糖、20ml新鲜卵黄、20ml甘油、0.5g咖啡因与0.5g环糊精。最后一步为，将上述各原料物质混匀后放56℃水浴箱30分钟灭活，待冷却后，过滤分装成品，待用。

然而，研发专门针对少、弱精子，睾丸、附睾精子冷冻保存、复苏的保护剂仍然是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种稀少精子冷冻保护剂。

本发明的再一的目的是，提供所述的稀少精子冷冻保护剂的用途。

本发明的另一的目的是，提供一种精子冷冻保存方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：