[发明专利]乳酸菌重组血红素加氧酶-1在保护炎症引起肠道损伤中的应用

说明书

技术领域

本发明公开了乳酸菌重组血红素加氧酶-1在保护炎症引起肠道损伤中的一种治疗方法，属于生物医药领域。 

背景技术

临床上多种原因可导致肠粘膜屏障功能下降，尤其是休克和内毒素血症。肠腔内大量细菌或内毒素向肠腔外迁移，即可发生内毒素和细菌移位(bacterial translocation，BT)，继而导致多种炎症介质的过度释放，成为系统性炎症反应综合征(system inflammatory response syndrome，SIRS)和多器官功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)。 

益生菌(probiotics)是指能在人体内存活，是对人体健康有益的一类微生物。它能够纠正肠道微生态失衡，维持肠道屏障功能和减少内源性感染。然而，单一应用益生菌尚不足以防止严重感染、创伤、休克等所致的肠粘膜屏障功能的破坏。乳酸乳球菌重组血红素加氧酶(heme oxygenase)是血红素分解代谢的限速酶，能明显减轻肠道炎症反应，对肠道屏障功能具有显著的保护作用。 

发明内容：

本发明公开了乳酸菌重组血红素加氧酶-1在保护炎症引起肠道损伤中的一种治疗方法，用于治疗由于各种炎症引起的肠道黏膜屏障损伤。 

本发明通过以下实验证明乳酸菌重组血红素加氧酶-1(乳酸乳球菌重组HO-1)在保护炎症引起肠道损伤中的作用：将32只健康清洁级雄性SD大鼠分为4组(n＝8):乳酸乳球菌(LL)-HO-1组、LL组、谷氨酰胺(Gln)、LL-HO-1+锌原卟啉(ZnPP)组。分别给予携带HO-1基因的乳酸乳球菌、乳酸乳球菌或谷氨酰胺，每日一次，共四次。第四天腹腔内注射内毒素，其中锌原卟啉于腹腔内注射内毒素前静脉注射，12小时后取末端回肠。比较各组动物的死亡率，检查肠组织病理学变化，并检测肠组织髓过氧化物酶活性、肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-10和血红素加氧酶-1的含量。另取32只健康清洁级雄性SD大鼠同样分为四组，经过相应的处理后，观察其48小时的生存率。与LL-HO-1+ZnPP组比较，LL-HO-1组和Gln组的生存率均明显升高(P<0.01)；与LL-HO-1+ZnPP组、LL组比较，LL-HO-1组和Gln组的Chiu’s评分(P<0.01)和肠组织MPO活性明显降低(P<0.01)，肠组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量明显减低(P<0.01)，白细胞介素-10(IL-10)的含量却显著的升高(P<0.01)，血红素加氧酶-1(HO-1)的含量明显增加(P<0.01)。证明了乳酸乳球菌重组血红素加氧酶-1能明显减轻肠道炎症反应，有较好的肠黏膜保护作用。 

具体实施方式

下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。 

乳酸乳球菌重组HO-1对感染性或失血性休克大鼠肠道屏障的保护作用：肠道功能在休克的早期首先受到伤害。我们将健康、清洁级标准的雄性SD大鼠30只，体重在280g～320g之间。随机分为5组(n＝10):(1) 假手术组(sham group)：大鼠只进行右股动脉分离和插管；(2)LL-HO-1组：连续每天一次灌注活菌数达2.5×10⁹CFULL-HO-1菌液1ml3天,然后复制失血性休克模型复制；(3)LL组:连续每天一次灌注活菌数达2.5×10⁹CFULL菌液1ml3天,然后复制失血性休克模型；(4)LL-HO-1+ZnPP组：连续每天一次灌注活菌数达2.5×10⁹CFULL-HO-1菌液1ml3天；在复制失血性休克模型前3小时皮下注射锌原卟啉(zinc protoporphyrin IX，ZnPP)20μmol.kg^-1；(5)谷氨酰胺组(glutamine,GLn):连续每天一次灌胃0.65g/kg、溶解于PBS的Gln 3天，然后复制失血性休克模型。所有动物均在实验前适应饲养环境7天，实验前禁食(12h以上)但不禁饮，实验后自由饮食，单独饲养。饲养环境和实验室环境温度保持在22℃-25℃之间。