[发明专利]一种滇南杜鹃的组培繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物生物技术中植物组织培养方法，具体地说，涉及杜鹃花滇南杜鹃的组织培养快繁方法。

背景技术

滇南杜鹃隶属于杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron L.)马银花亚属(Subgen.Azaleastrum)长蕊组(Sect.Azaleastrum)，常绿灌木。滇南杜鹃花白色，有浓郁的香味，是香料提取的良好材料，具有较高的经济利用价值。由于滇南杜鹃分布地域狭窄，材料有限，难以满足香料生产的原材料供应。

目前，组培快繁已成为中药材、花卉、濒危物种苗木生产的重要手段。据研究报道杜鹃对培养基的适应性与杜鹃的基因型密切相关，不同品种的杜鹃对培养基的适应程度不同。对于杜鹃花科植物，目前已经报道适合组织培养使用的基本培养基有Read、Anderson、WPM等，但由于杜鹃花科植物种类丰富、种间差异较大，应用时还需结合不同的杜鹃花亚属甚至亚组进行调整。

迄今，滇南杜鹃没有相关生物技术方法繁殖的研究与报道，为了使滇南杜鹃能广泛应用于香料生产，解决滇南杜鹃自然匮乏、引种驯化难的问题，以更大的量和更快的速度供应市场的需求，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。

发明内容

本发明的目的是提供滇南杜鹃的组织培养方法，使之在野外分布区域狭窄，引种驯化难度大的情况，加快种苗繁殖，使之为香料市场提供足够的原材料，为滇南杜鹃的可持续利用奠定组培种苗繁育基础。

为了实现本发明的目的，本发明提供了如下的技术方案：

一种滇南杜鹃的组培繁殖方法，该方法包括以下步骤：

1)外植体选择与消毒：取滇南杜鹃开花后嫩茎段为外植体，冲洗干净后消毒；

2)改良培养基：改良Anderson培养基：将其中的NH₄NO₃由400mg/L减少为350mg/L，KNO₃由480mg/L减少为380mg/L，其余元素不变；

3)丛生芽诱导：丛芽诱导培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+3.0mg/L2-iP+0.5mg/L ZT+0.8mg/L IAA+0.5g/L AC，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2，暗培养7天后进行光照培养30天；

4)继代培养：继代培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+2mg/L 2-iP+0.4mg/L IAA，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2，继代培养30天；

5)壮苗培养：壮苗培养基为步骤2)的改良Anderson培养基+1mg/L IAA，蔗糖35g/L，琼脂7g/L，pH5.1-5.2；

6)移栽：选取3cm高，茎粗达到1.5mm-2mm进行瓶外生根，用1mg/LNAA泡根1小时后移栽。

根据所述的组培繁殖方法，其中所述丛生芽诱导为全黑暗诱导7天后进行人工辅助光诱导，光强度为2000LUX，温度为20-23℃；继代及壮苗培养的光照条件为人工辅助光2500LUX-3000LUX，温度为18-23℃。

根据所述的组培繁殖方法，其中所述移栽是壮苗在瓶内生长至3cm高，茎粗达1.5mm-2mm后经瓶内炼苗后分离，移到瓶外，生根时，将切口泡入1mg/LNAA 1小时后移栽至大棚。

根据所述的组培繁殖方法，其中所述移栽之前，移栽基质用800倍多菌灵进行喷施消毒，所述移栽基质为底层为碎石，中层为体积比为1份珍珠岩+2份腐殖土+1份红土，上层为体积比为1份珍珠岩+1份腐殖土，pH为5.1-5.2，大棚温度为20-30℃，空气湿度50～60％，基质湿度70～80％。

本发明的方法可以更具体地表述如下：

滇南杜鹃的组培繁殖方法，包括选择外植体、消毒、丛生芽诱导，瓶外移栽生根步骤，取滇南杜鹃的开花后的新嫩茎段为外植体，消毒先用5ml洗洁精定容于1L水溶液中进行浸泡清洗20min，再用无菌水冲洗至无泡沫后采用75％的酒精灭菌20s，无菌水冲洗3遍后，用0.1％升汞溶液添加2滴表面活性剂吐温-20进行表面消毒6min，分两次进行，第一次消毒4min，不断震荡后用无菌水清洗3-5遍，再用0.1％升汞消毒2min后用无菌水清洗3-5遍。