[发明专利]一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法

说明书

技术领域

本发明属于烟草中有害物质成分检测技术领域，特别是涉及一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法。

背景技术

烟草特有N-亚硝胺(TSNAs，Tobacco-Specific Nitrosamines)是发现仅存在于烟草和烟气中的非挥发性亚硝胺。一般认为，烟草特有N-亚硝胺是在烟草调制过程中通过烟草生物碱硝化作用形成的。其中烟草中主要含有4种，即N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)和N-亚硝基新烟草碱(NAT)。对以往的动物或人体毒理学研究的权重分析表明，TSNA是烟草中致癌作用最强的物质之一，它们一直都是烟草行业研究的热点问题。

目前，实际烟草样品通常指烟叶样品、烟草烘干后研磨得到的粉末、料液、烟丝、烟梗等。烟草样品未经燃烧，与烟草燃烧后获得的烟气样品差别很大。而且，实际烟草样品基质非常复杂，一般采用色谱分离与选择性检测器相结合来检测烟草和烟气中的TSNA。对于烟草中TSNA的测定，采用的分析技术包括：(1)GC-TEA,(2)GC/MS-SIM,(3)GC-NPD,(4)HPLC-MS/MS法，(5)GC/GC-MS。其中，由于热能分析仪(TEA)对亚硝胺类具有很高的选择性，所以GC-TEA是应用最广泛的检测方法，但是TEA的缺点是仪器价格昂贵且用途单一。而GC/MS和GC-NPD虽然十分普及，但是对亚硝胺的选择性比TEA差很多，背景干扰较为严重，需要繁琐的液-液萃取和固相萃取等净化步骤。HPLC-MS/MS价格昂贵，且对TSNA四种物质的色谱分离能力有一定局限性。GC/GC-MS(多维气相-色谱)虽然可以提高对复杂体系的分析能力，有效降低本底干扰，提高复杂体系中痕量组分的检测灵敏度，但仍需要纯化和浓缩，样品前处理较为复杂。因此，有必要对烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法进行进一步的探讨和研究。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，用于解决现有技术中缺乏处理过程简单、分离效果好、选择性和灵敏度高的烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法的问题。

为实现上述目的，本发明提供一种烟草中烟草特有N-亚硝胺的测定方法，通过混合溶剂进行萃取，再采用气相色谱三重四极杆串联质谱法(GC-QQQ-MS/MS)测定烟草中烟草特有N-亚硝胺的含量，具体包括以下步骤：

较佳的，所述烟草特有N-亚硝胺包括有N-亚硝基去甲基烟碱(NNN)、4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮(NNK)、N-亚硝基假木贼碱(NAB)和N-亚硝基新烟草碱(NAT)。

1)标准溶液的配制：

A、分别称取NAB、NAT、NNN、NNK的标准品，加入甲醇定容，配成混合标准储备溶液；

较佳的，所述NAB、NAT、NNN、NNK的标准品的浓度均为0.5mg/ml。

较佳的，所述混合标准储备溶液中NAB、NAT、NNN、NNK的浓度均为5μg/ml。

B、分别称取d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK，加入甲醇定容，配成内标溶液；

较佳的，所述内标溶液中d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK的浓度均为400ng/ml。

较佳的，所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK为氘代试剂。具体的，所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK分别为氘代N-亚硝基去甲基烟碱、氘代N-亚硝基新烟草碱、氘代N-亚硝基假木贼碱、氘代4-(甲基亚硝基氨基)-l-(3-比啶基)-1-丁酮。

所述d4-NNN、d4-NAT、d4-NAB、d4-NNK为商品化试剂，其化学性质稳定，适于作为内标。

C、分别移取不同体积的步骤A中混合标准储备溶液，再分别加入一定体积的步骤B中内标溶液，用甲醇定容配制为一系列不同浓度的混合标准溶液。

较佳的，所述标准溶液的浓度为0.5-50ng/ml。

2)样品前处理：称取烟草粉末样品，加入含有步骤1)中所述内标溶液的混合溶剂，超声萃取后离心，取上清液，待测；

较佳的，所述烟草粉末样品的重量为1-2g。

较佳的，所述混合溶剂为有机溶剂和氢氧化钠的混合溶剂。

进一步的，所述有机溶剂选自二氯甲烷和甲醇中的任意一种。优选的，所述有机溶剂为二氯甲烷。