[发明专利]一种转基因大豆油DNA提取方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，是一种适用于PCR扩增的转基因大豆油DNA的提取方法。

背景技术

目前从转基因大豆被批准种植以后，世界上每年的种植面积都在增加，至今已增加到5000多万公顷，并且还有增加的趋势。中国是转基因大豆的主要进口国家之一。进口转基因大豆多用于提取大豆油，因此大豆油转基因检测十分重要。2002年我国农业部发布的《转基因生物标识管理办法》及卫生部出台的《转基因食品卫生管理办法》规定，包括大豆、玉米、油菜、棉花、番茄5类17种产品以及以转基因动植物、微生物或者其直接加工品为原料生产的食品和食品添加剂必须进行标识。除此之外，实用植物油的核酸检测技术在植物油原料成分鉴定、掺假食用油的鉴定领域的需求也日显突出。人们日常食用的大豆油多为精炼大豆油，在得到粗油后又经较为复杂的精炼过程，仅沉降和脱胶两个步骤就除去大豆粗油中大部分的DNA，DNA提取非常困难，导致后续的转基因检测很难实现。高质量DNA模板的获取，是转基因大豆油进行检测的前提，因此，研究精炼大豆油中DNA的提取方法，不仅对实施食品标签和标识，保护消费者的知情权和选择权具有重要意义，同时对食用油脂的掺假检测也具有重要的参考意义。

发明内容

本发明的目的是建立一种方便、简单的转基因大豆油DNA的提取方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种转基因大豆油DNA提取方法，首先将转基因大豆油与TE溶液混合，磁力搅拌器搅拌2h乳化，12000r/min离心20min，小心取出下层水相；加入等体积的异丙醇，混匀，常温静置30min，12000r/min离心15min，去上清保留沉淀；加入TE溶解沉淀，加入2/3体积的氯仿：异戊醇进行抽提，12000r离心15min，取出上清，加入等体积异丙醇沉淀10min，离心10min，倒掉上清；用无水乙醇洗涤沉淀；沉淀常温干燥后，用50ulTE溶液溶解，即得到转基因大豆油的DNA溶液。

本发明的转基因大豆油DNA提取方法的有益效果是：可以从转基因大豆油中提取到高质量的适宜于PCR检测的基因组DNA，操作简单、耗时短、利于快速检测。 

具体实施方式

本发明的一种转基因大豆油DNA提取方法，包括以下步骤：

（1）取30ml转基因大豆油，加入12mlTE溶液，置于磁力搅拌器上搅拌2h，充分乳化；

（2）将乳化的大豆油放入45ml离心管中12000r，离心20min；

（3）小心去掉上层油相，取水相，加入等体积的异丙醇常温静置30min；

（4）12000r/min离心15min，小心倒掉上层液体，留沉淀；

（5）加入1ml TE溶液溶解沉淀；

（6）加入2/3体积的氯仿：异戊醇进行抽提，氯仿：异戊醇体积比为24:1；

（7）12000r，离心15min，取上清，加入等体积的异丙醇，沉淀10min；

（8）12000r离心10min，弃上清，留沉淀；

（9）用预冷的无水乙醇洗涤沉淀，12000r离心1min；

（10）沉淀在室温干燥，用50ul TE溶液溶解，-20℃贮存备用。