[发明专利]一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法

权利要求书

1.一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，包括如下步骤：

A、外植体处理：取丹参种子作为外植体，接种到MS空白培养基上，培养成为无菌苗，在无菌状态下将丹参无菌苗幼叶、茎、根分别剪下，叶片成块，茎及根成段；

B、愈伤组织的诱导：选用MS作为丹参愈伤组织诱导的基本培养基，将步骤A制备好的外植体接种于MS培养基中添加0.5mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸、0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.5mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的Vc，培养基的蔗糖浓度为3％，琼脂浓度为1％，pH值为5.0-6.5，在光照12小时/天，光照强度为3000Lux条件下培养30天，温度为25℃，得到颜色有光泽呈鲜黄绿色、生长旺盛、疏松的愈伤组织；

C、细胞的悬浮培养：将步骤B得到的愈伤组织接种到于与步骤B中所使用的MS培养基相同组分和含量的液体培养基中，培养温度28℃，黑暗条件下，120r/min振荡培养，每18-20天进行一次继代培养，继代培养3-15次后得到分散性良好的悬浮细胞系；

D、茉莉酸甲酯诱导丹参悬浮细胞：在无菌条件下，取新鲜继代5次以上得到丹参悬浮细胞，按悬浮细胞体积计算，将茉莉酸甲酯用无菌注射器通过无菌过滤膜注入悬浮细胞系中，终浓度为0.1mM/L，培养12天以上。

2.根据权利要求1所述的一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步骤A中，叶片制成0.5×0.5cm的块，茎及根制成1cm的段。

3.根据权利要求1所述的一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步骤B中，2,4-二氯苯氧乙酸的配置方法如下：

取10mg的2,4-二氯苯氧乙酸，先溶于95％乙醇中，然后加入去离子水加热溶解，定容至100mL，冷藏保存。

4.根据权利要求1所述的一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步骤B中，6-苄氨基腺嘌呤的配置方法如下：

取50mg的6-苄氨基腺嘌呤，先溶于少量1mol/L的氢氧化钠中，然后用去离子水定容至100mL，冷藏避光保存。

5.根据权利要求1所述的一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步骤B中，萘乙酸的配置方法如下：

取50mg的萘乙酸，先溶于少量1mol/L的氢氧化钠中，然后用去离子水定容至100mL，冷藏保存。

6.根据权利要求1所述的一种快速提高丹参中迷迭香酸含量的方法，其特征在于，所述的步骤B中，pH值为6.0-6.5。