[发明专利]一种同时测定血浆中脂蛋白磷脂酶A2与C反应蛋白含量的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种同时测定血浆中脂蛋白磷脂酶A2与C反应蛋白含量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：在同时包被有抗Lp-PLA2单克隆抗体a与抗CRP单克隆抗体c的微孔板上，加入Lp-PLA2与CRP标准品或EDTA抗凝血液离心后得到的血清样本到各自的微孔中，振荡反应后洗涤，加入荧光物质标记的抗Lp-PLA2单克隆抗体b和荧光物质标记的抗CRP单克隆抗体d，振荡反应，洗涤液洗涤；用荧光仪测定其荧光强度cps，荧光强度，对照标准曲线即可确定样品中Lp-PLA2与CRP含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的荧光物质为荧光染料、镧系螯合物或量子点中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的抗Lp-PLA2单克隆抗体a与抗Lp-PLA2单克隆抗体b分别识别Lp-PLA2的不同表位且互不影响，其中，所述的抗Lp-PLA2单克隆抗体a与抗Lp-PLA2单克隆抗体b通过单克隆杂交瘤细胞技术制备得到或者通过噬菌体抗体技术筛选得到。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的抗CRP单克隆抗体c和抗CRP单克隆抗体d分别识别CRP的不同表位且互不影响，其中，所述的抗CRP单克隆抗体c和抗CRP单克隆抗体d通过单克隆杂交瘤细胞技术制备得到或者通过噬菌体抗体技术筛选得到。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的洗涤液为含0.05wt％TWEEN-20的0.01M磷酸盐缓冲液(1×PBST)。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，抗Lp-PLA2单克隆抗体a和抗CRP单克隆抗体c混合后包被于板孔内的任意位置，且抗Lp-PLA2单克隆抗体b和抗Lp-PLA2单克隆抗体d用不同的荧光物质标记；或者，抗Lp-PLA2单克隆抗体a与抗CRP单克隆抗体c分别包被于板孔内的不同位置，且抗Lp-PLA2单克隆抗体b和抗Lp-PLA2单克隆抗体d用相同的荧光物质标记。

7.一种同时检测测定血浆中脂蛋白磷脂酶A2与C反应蛋白含量的试剂盒，其特征在于，包括如下部分：同时包被有抗Lp-PLA2单克隆抗体a与抗CRP单克隆抗体c的微孔板、标记荧光物质的抗Lp-PLA2单克隆抗体b与标记荧光物质的抗CRP单克隆抗体d溶液、Lp-PLA2与CRP阳性质控血清、Lp-PLA2与CRP阴性质控血清和浓缩洗液。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗Lp-PLA2单克隆抗体a与抗Lp-PLA2单克隆抗体b分别识别Lp-PLA2的不同表位且互不影响，其中，所述的抗Lp-PLA2单克隆抗体a与抗Lp-PLA2单克隆抗体b通过单克隆杂交瘤细胞技术制备得到或者通过噬菌体抗体技术筛选得到。

9.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的抗CRP单克隆抗体c和抗CRP单克隆抗体d分别识别CRP的不同表位且互不影响，其中，所述的抗CRP单克隆抗体c和抗CRP单克隆抗体d通过单克隆杂交瘤细胞技术制备得到或者通过噬菌体抗体技术筛选得到。

10.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述的Lp-PLA2与CRP阳性质控血清是在正常人血清中分别添加中添加Lp-PLA2与CRP标准品制得，添加量为正常血清中Lp-PLA2和CRP含量的临界值的3倍；其中，正常血清Lp-PLA2Lp-PLA2和CRP含量的的临界值分别为175ng/ml和1μg/ml；所述的Lp-PLA2与CRP阴性质控血清是正常人血清，其中，Lp-PLA2含量低于175ng/ml，CRP含量低于1μg/ml。