[发明专利]一种羧甲基茯苓多糖的制备方法及其新用途

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物化学技术领域，具体涉及一种羧甲基茯苓多糖的制备方法及其新用途。

背景技术

茯苓[Poria cocos(Schw.)Wolf]是一种食药用真菌，是中药“四君八珍”之一，具有利水渗湿，健脾宁心之功效，现代医学研究更进一步证明茯苓具有抗肿瘤、利水消肿、增强免疫、镇定安神和抑菌等多种作用。茯苓中含有多种化学成分，其中最主要的是茯苓多糖，其含量可达茯苓干重的84％。茯苓多糖分子量分布较广，大分子量的可达100万道尔顿，小分子量的在5000～9000道尔顿之间均有分布。茯苓多糖易溶于中、强碱溶液中，难溶于水，其主体结构为β-(1-3)结合的葡萄糖线性结构，同时还具有β-(1-6)结合的葡萄糖基支链的结构。现代科学研究表明，未经化学改性的茯苓多糖没有抗肿瘤活性及免疫增强的功能，茯苓多糖在水溶液中的提取率不超过1％，大部分被当成药渣弃去，造成严重的浪费。

化学改性已成为提高天然多糖生物活性的重要手段：引入合适的离子基团能够显著改善水溶性，同时通过改变多糖在水溶液中的链构象提高其活性；不同的取代基团、取代位置和取代度对多糖衍生物的活性有重要影响，其活性的高低与引入的不同取代离子基团、取代度、取代位、水溶性、分子量和链的构象有关。茯苓多糖难溶于水，为了改善其水溶性，提高生物活性，充分发挥其生理功效,可以采用硫酸酯化(Sulfation)、羧甲基化(Carboxymethylation)、羟乙基化(Hydroxyeth—ylation)、羟丙基化(Hydroxypropylation)及甲基化(Methylation)等半合成衍生化方法对茯苓多糖进行化学改性来增大其溶解度、提高生物活性，取代程度越高，在水中的溶解度就越大，生物利用度越高，生物活性则越强。

Gamuro等人(1971年)采用异丙醇与水为介质，在液固相振荡条件下合成制取羧甲基茯苓多糖，因需大型振荡设备，难以进行工业化生产，且需要大量的有机溶剂(如乙醚，甲醇、异丙酮、醋酸和乙醇)对羧甲基茯苓多糖进行后处理及纯化，不仅生产成本较高，还造成环境污染。

20世纪八九十年代以来，国内研究者如石清东、陈春霞、张金蓱等人均以乙醇与水的混合液为介质，采用液固相搅拌条件下取代制取羧甲基茯苓多糖。虽然在设备和反应介质上有了很大的提升，但是反应的持续时间过长，一般都需要四五十个小时，效率低下。

同时，目前关于羧甲基茯苓多糖的应用研究，仅涉及人药的抗肿瘤应用，对于其他功效及应用未见相关报道。

发明内容

本发明旨在针对现有技术的技术缺陷，提供一种制备羧甲基茯苓多糖的方法，以实现提高茯苓多糖羧甲基化效率、缩短反应时间，所获得产物的取代度更高、水溶性更好等技术目的。

同时本发明旨在挖掘羧甲基茯苓多糖其他功效特征，进而拓展其新用途。

为实现以上技术目的，本发明采用以下技术方案：

一种制备羧甲基茯苓多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取茯苓菌核进行干燥、粉碎，得到茯苓微粉；

2)取醇类溶剂和水混合，得到水醇混合液；

3)向步骤2)得到的水醇混合液中加入步骤1)得到的茯苓微粉、第一NaOH，充分搅拌，得到茯苓多糖提取液；

4)取第二NaOH加入到氯乙酸中反应，得到氯乙酸碱化液；

5)将步骤4)得到的氯乙酸碱化液加入到步骤3)得到的茯苓多糖提取液中，再加入催化剂，充分反应，而后调溶液pH至中性，收集固相；

上述催化剂选自聚乙二醇、链状聚乙二醇二烷基醚、苄基三乙基氯化铵、四丁基溴化铵的其中一种或几种的组合。

优选的，步骤5)所述反应是在搅拌条件下进行的。

优选的，步骤5)所述催化剂的用量是所述茯苓微粉用量的10～20％(w/w)。

优选的，步骤5)所述反应的温度为50～80℃，更优的为65～75℃。

优选的，步骤5)所述反应的时间为3～6h，更优的为4～5h。

优选的，步骤3)具体为：先向步骤2)得到的水醇混合液中加入步骤1)得到的茯苓微粉，搅拌均匀，而后再加入第一NaOH，充分搅拌，得到茯苓多糖提取液。

优选的，所述第一NaOH、第二NaOH二者总量与所述茯苓微粉用量的比值为(0.3～0.5):1(w/w)。进一步优选的：所述第一NaOH与茯苓微粉用量的比值为(0.12～0.2):1；所述第二NaOH与茯苓微粉用量的比值为(0.18～0.3):1。

优选的，所述茯苓微粉与所述氯乙酸的用量比值为3.8～4.762(w/w)。