[发明专利]一种基于mmLDL上调脑基底动脉的ETB受体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学领域，特别涉及一种基于mmLDL上调脑基底动脉的ETB受体的方法。

背景技术

弱氧化低密度脂蛋白(Minimally modified low density lipoprotein，mmLDL)是脑血管疾病的危险因子。氧化型低密度脂蛋白(Fully oxidized LDL，oxLDL)是mmLDL进一步氧化的产物。mmLDL和oxLDL诱导细胞分裂和增殖，导致细胞死亡，促进炎症分子和生长因子的表达。mmLDL可以和细胞膜上的LDL受体结合。有研究显示mmLDL发挥生物效应与激活受体介导的信号转导途径有关。

脑血管内皮分泌内皮素-1(endothelin-1，ET-1)通过激活内皮素A(endothelin type A，ET_A)受体和内皮素B(endothelin type B，ET_B)受体介导脑血管收缩和增殖。内皮细胞上ET_B受体介导舒张功能。ET_B受体可塑性强，在试验性脑缺血动物模型，动脉粥样硬化病变部位，充血性心衰动物模型，蛛网膜下腔出血动物模型，在器官培养血管发现激活转录，使血管平滑肌上出现了介导血管收缩的ET_B受体。

蛋白激酶C(protein kinase C，PKC)家族是包含丝氨酸/苏氨酸的激酶，参与激素、神经递质及生长因子刺激诱发的信号转导。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族是另一类含有丝氨酸/苏氨酸的激酶的家族，在平滑肌细胞信号瀑布级联传导时，位于PKC的下游。MAPK分为3型，ERK1/2(extracellular signal related kinases 1 and 2，ERK1/2)型，JNK(C-jun terminal kinase，JNK)型，及p38 MAPK。MAPK将细胞外信号传达入细胞内，是细胞内信号转导途径。核转录因子-κB(Transcription factor nuclear factor-kappaB，NF-κB)是下游的转录因子参与炎症介质的调节和表达。

对脑血管环的器官培养是一种体外模型，实验证明器官培养能很好模拟脑血管疾病时G-蛋白偶联受体的变化，并且器官培养方法利于进一步研究受体改变的分子机制。现有技术中对于mmLDL对脑基底动脉ET_B受体的影响机制尚不清晰，因此，急需一种实验方法，来研究mmLDL是否改变ET_B受体介导的收缩功能及受体表达，同时观察涉及的细胞内信号转导分子机制。

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种基于mmLDL上调脑基底动脉的ETB受体的方法。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种基于mmLDL上调脑基底动脉的ETB受体的方法。其具体步骤为：

步骤一、动脉环的制备及器官培养

SD大鼠用CO₂麻醉，断头处死，迅速取出大脑放入冷的碳酸氢盐缓冲液，取出脑基底动脉，显微镜下剥离血管周围组织，血管内插入一根细线机械旋转去除内皮，将处理好的血管切成1mm长的圆环，当乙酰胆碱引起的舒张率＜10％，认为内皮已被去除，

血管环在24孔板进行器官培养，每孔2个血管环，每孔加入含100μg/ml链霉素、100U/ml青霉素的培养液培养24h，在37℃，含5％CO₂和95％O₂的培养箱内培养，由于器官培养本身可以在脑基底动脉诱发ET_B受体上调，在考察mmLDL对ET_B受体的作用时将器官培养组设为一个对照组，LDL组为另一个对照组，预实验脑基底动脉环分别与5，10和20μg/mL的mmLDL共培养，培养时间分别为6，12，24和48h，预实验显示1μL的DMSO加入1mL的DMEM不影响实验结果，为了考察mmLDL对ET_B受体的作应机制，使用了信号转导通路的特异性拮抗剂，