[发明专利]基于PCR-RFLP鉴定金银花品系大毛花和鸡爪花的方法有效
| 申请号： | 201410599277.0 | 申请日： | 2014-10-30 |
| 公开（公告）号： | CN104328180A | 公开（公告）日： | 2015-02-04 |
| 发明（设计）人： | 黄璐琦;袁媛;蒋超;胡添源 | 申请（专利权）人： | 中国中医科学院中药研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100700 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 pcr rflp 鉴定 金银花 品系 大毛 鸡爪花 方法 | ||
1.一种用于鉴定金银花品系大毛花和鸡爪花的试剂盒，含有由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对，以及限制性内切酶MfeI或其同裂酶。
2.权利要求1所述的试剂盒在鉴定或辅助鉴定待测金银花为大毛花品系还是鸡爪花品系中的应用。
3.一种鉴定或辅助鉴定待测金银花为大毛花品系还是鸡爪花品系的方法，包括如下步骤：
(1)以待测金银花的基因组DNA为模板，采用由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增；
(2)采用限制性内切酶MfeI对步骤(1)所得PCR产物进行完全酶切；
(3)按照如下方法确定所述待测金银花的品系：若经步骤(2)酶切获得的DNA片段为如下(a1)，则所述待测金银花为或候选为大毛花品系；若经步骤(2)酶切获得的DNA片段为如下(a2)或(a3)，则所述待测金银花为或候选为鸡爪花品系：
(a1)大小分别为102bp和177bp的两个DNA片段；
(a2)大小为279bp单一DNA片段；
(a3)大小为102bp、177bp和279bp的三个DNA片段。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，大小为102bp的DNA片段的核苷酸序列为序列表中序列3的第1-102位，大小为177bp的DNA片段的核苷酸序列为序列表中序列3的第103-279位，大小为247bp的DNA片段的核苷酸序列为序列表中序列4。
5.一种用于鉴定金银花品系大毛花和鸡爪花的引物对，为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对。
6.权利要求5所述的引物对在鉴定或辅助鉴定待测金银花为大毛花品系还是鸡爪花品系中的应用。
7.一种鉴定或辅助鉴定待测金银花为大毛花品系还是鸡爪花品系的方法，包括如下步骤：
(1)以待测金银花的基因组DNA为模板，采用权利要求5所述的引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；
(2)按照如下方法确定所述待测金银花的品系：若所述PCR产物为如下(b1)，则所述待测金银花为或候选为大毛花品系；若所述PCR产物为如下(b2)或(b3)，则所述待测金银花为或候选为鸡爪花品系：
(b1)单一PCR产物：核苷酸序列为序列表中序列3所示的DNA片段；
(b2)单一PCR产物：核苷酸序列为序列表中序列4所示的DNA片段；
(b3)两种PCR产物：核苷酸序列为序列表中序列3所示的DNA片段，以及核苷酸序列为序列表中序列4所示的DNA片段。
8.根据权利要求3、4或7所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，进行所述PCR扩增时采用的退火温度为52-58℃。
9.权利要求1所述试剂盒的制备方法，包括将序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子以及限制性内切酶MfeI或其同裂酶分别单独包装的步骤。
10.权利要求5所述引物对的制备方法，包括将序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子分别单独包装的步骤。
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