[发明专利]木薯绵粉蚧特异性SS-COI引物对及快速PCR检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地，本发明涉及木薯绵粉蚧特异性SS-COI引物对及快速PCR检测方法和试剂盒。

背景技术

木薯绵粉蚧(Cassava mealybug)Phenacoccus manihoti Matile-Ferrero，属半翅目、粉蚧科、绵粉蚧属，是一种世界性检疫害虫，2011年6月20日中华人民共和国农业部和国家质量监督检验检疫总局联合发布公告将其列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》(农业部国家质检总局公告第1600号)，并要求各出人境检验检疫机构依法加强对该虫发生国家或地区寄主植物的检验检疫。木薯绵粉蚧嗜食木薯尤其是甜木薯，并常在木薯上暴发成灾，而在其寄主植物上迄今尚未有成灾的报道。已有的研究表明，木薯绵粉蚧的寄主植物有15科27种加3属，包括农作物、园林植物、杂草和果树等，严重受害的植物有大戟科的木薯、一品红、木薯胶、异叶南洋杉、飞扬草、苦竹等；马齿苋科的菜用土人参、马齿苋等；菊科Aspilla属植物、胜红蓟、金腰箭属的苦草Sydrella nodiflora、紫茎泽兰、飞机草等；椴树科的黄麻属植物；茜草科的伞房花耳草；荨麻科的甜麻；苋科苋属植物；蔷薇科的木瓜；茄科的番茄、马铃薯、辣椒等；豆科的花生、大豆等；锦葵科的秋葵、棉花等；薯蓣科薯蓣属的一种植物Dioscera sp.、甘薯等；凤梨科的菠萝；芸香科的柑橘；葫芦科的南瓜等。而且，随着木薯绵粉蚧入侵区域的逐渐扩大和定居时间的推移，其寄主植物的种类和危害程度有进一步增加的趋势。木薯绵粉蚧营孤雌生殖，主要以雌性成虫和若虫群居在寄主植物的幼嫩部位进行刺吸为害，为害部位包括嫩枝、嫩叶、嫩梢、花芽和叶柄以及窖储块根、块茎等，受害木薯叶片发黄、卷曲、脱落，受害植株长势衰弱，生长缓慢或停滞，失水干枯，亦可造成叶片大量脱落、生长点丛生、枝条畸形、嫩枝枯死；而成虫和若虫分泌的蜜露诱发的煤污病不仅严重影响植物的光合作用，还可导致叶片枯萎脱落，严重时可造成植株成片死亡；此外，木薯绵粉蚧还可传播重大检疫性病原物非洲木薯花叶病毒。如上世纪70年代木薯绵粉蚧传入非洲刚果，并迅速扩散至非洲所有的木薯种植区，成为非洲木薯的主要害虫，导致木薯减产84％，每年造成的经济损失高达20亿美元；又如，在我国的邻邦泰国，2009年初发现木薯绵粉蚧，5月份其危害面积就达16万公顷，仅20个府的损失就有28亿铢(约合8629.6万美元)，用于防治木薯绵粉蚧的费用达6500万铢(约合200万美元)。

木薯绵粉蚧原产于南美洲中部，是当地木薯上的一种重要害虫，后随寄主植物及其产品传播扩散，陆续在西非、中非、东非发现，给非洲木薯产业造成巨大损失。2008年(或许更早)传入泰国，目前已在亚洲的泰国、老挝、柬埔寨、越南、印度尼西亚，非洲的安哥拉、贝宁、布隆迪、刚果、科特迪瓦、冈比亚、加纳、几内亚、几内亚比绍、肯尼亚、马拉维、莫桑比克、尼日利亚、卢旺达、塞内加尔、塞拉利昂、苏丹、坦赞尼亚、扎伊尔、中非共和国，南美洲的阿根廷、玻利维亚、巴西、哥伦比亚、巴拉圭、圭亚那等31个国家和地区严重发生，是威胁世界木薯生产安全的重大入侵害虫。经多方考证，目前我国尚未发现木薯绵粉蚧，然而，木薯绵粉蚧在我国广东、广西、海南等省的绝大部分地区以及福建、江西、贵州、云南等省份部分地区高度适生，在重庆、四川等部分地区中度适生。因此，尽快研发木薯绵粉蚧快速检测技术，加强对木薯绵粉蚧的监测检测，是保障我国木薯及蔬菜花卉产业和水果、棉花产业健康发展的必要前提。

木薯绵粉蚧为小型昆虫，营孤雌生殖，雌性成虫卵圆形，活体粉红色，被白色蜡粉，体长1.17-2.37mm；卵长0.31-0.42mm，初孵若虫体长0.49-0.75mm，淡粉红色，略微透明，肉眼难以发现。雌性成虫将卵产于生殖孔附近的棉絮状的卵囊内，初孵若虫活跃，从卵囊爬出后短时间内即可取食危害，并可迁移至邻近植株。而加强检疫和监测必需建立一套快速准确的分子检测方法。目前国际上用于木薯绵粉蚧鉴定的方法主要有：1)形态特征鉴定。但目前国内针对木薯绵粉蚧尚没有任何标准的检测方法，并且基于形态学特征的《木薯绵粉蚧检疫鉴定方法》的行业标准尚未纳入制定规划。