[发明专利]ASPL‑TFE3融合性肾癌基因探针及其试剂盒应用

说明书

技术领域

本发明属于荧光原位杂交探针的应用领域，特别涉及ASPL-TFE3融合性肾癌基因探针及其试剂盒应用。

背景技术

Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌好发于青少年，约占儿童肾癌的1/3，45岁以下肾癌的15％，预后较差，成年患者较儿童预后更差，主要与病理分型、肿瘤分级分期、是否有远处转移等有关。Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性对常规的免疫治疗无效，对放化疗也不敏感，手术是其主要的治疗方式，患者易出现淋巴结和远处转移，只有靶向治疗被证明有一定作用。

ASPL-TFE3融合性肾癌是Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌8种分型中发病率最高的一种，其最显著的特征是在Xp11.2位点上TFE3基因与17号染色体上的ASPL基因发生断裂易位，并形成新的ASPL-TFE3融合基因，并由此引发细胞信号通路及细胞代谢调控紊乱导致的一种肾细胞癌。同时，ASPL-TFE3融合性肾癌也是恶性程度最高，肿瘤预后最差的Xp11.2易位/TFE3基因融合相关性肾细胞癌。ASPL-TFE3融合性肾癌的肿瘤细胞生长增殖速度快以及侵袭性高，细胞之间黏附性较差，常在诊断时就已经发生淋巴结或者远处转移，远期预后差，需要采取积极的治疗手段以延长患者生存期和提高生存质量，所以ASPL-TFE3融合性肾癌准确诊断对判断患者的预后以及术后的辅助治疗至关重要。

在本发明之前，能够诊断ASPL-TFE3融合性肾癌的方法只有RT-PCR和细胞核型分析。核型分析必须对肿瘤细胞进行培养至有丝分裂期后，利用G显带等技术对肿瘤细胞进行核型分析，这种方法繁琐且耗时不适合在临床工作中应用。同样的，考虑到ASPL-TFE3融合性肾癌的少见性以及PCR试验流程的复杂性是无法常规利用RT-PCR对所有肾癌组织进行ASPL-TFE3融合基因检测的，而当怀疑ASPL-TFE3融合性肾癌时只能从石蜡切片中提取RNA，RNA的快速降解以及很多其他因素均限制了RT-PCR的应用，且技术复杂不适合广泛应用。这些限制导致了ASPL-TFE3融合性肾癌无法准确、及时的诊断，影响临床医师对ASPL-TFE3融合性肾癌患者预后以及术后处理的判断。目前亟需一种可以准确、快速、经济诊断ASPL-TFE3融合性肾癌的方法。

发明内容

本发明的目的就在于克服上述诊断方法的缺陷，提供一种ASPL-TFE3融合性肾癌基因探针及其试剂盒应用。

本发明的技术方案是：

ASPL-TFE3融合性肾癌的基因探针，其主要技术特征在于基因探针选用的克隆片段分别是RP11-634L10、RP11-51H16和RP11-475F12组合，以及CTD-2311N12、RP11-416B14、CTD-2522M13、CTD-2516D6、CTD-2312C1、CTD-2248C21和RP11-959H17组合。

所述的基因探针，其中RP11-634L10、RP11-51H16和RP11-475F12组合定位于17号染色体ASPL基因上，三者标记为相同的红色荧光信号。

所述的基因探针，其中CTD-2311N12、RP11-416B14、CTD-2522M13、CTD-2516D6、CTD-2312C1、CTD-2248C21和RP11-959H17组合定位于X染色体TFE3基因上，均标记为相同的绿色荧光信号。

所述的位于17号染色体ASPL基因、X染色体TFE3基因上的克隆片段组合所标记的颜色分别为红色和绿色，颜色可以互换。

本发明的另一技术方案是：

ASPL-TFE3融合性肾癌基因探针试剂盒，该试剂盒由探针杂交液以及4′，6一二脒基-2-苯基吲哚复染剂组成，其主要技术特征在于：

(1)定位于17号染色体ASPL基因上的RP11-634L10、RP11-51H16和RP11-475F12组合，标记为红色荧光信号；定位于X染色体TFE3基因上CTD-2311N12、RP11-416B14、CTD-2522M13、CTD-2516D6、CTD-2312C1、CTD-2248C21和RP11-959H17组合，标记为绿色荧光信号；

(2)探针杂交液是由所述探针与Human Cot-1DNA、杂交缓冲液、纯化水按比例混合配置而成，需要-20℃避光冷冻保存；

(3)4′，6一二脒基-2-苯基吲哚复染剂主要用于细胞核染色。