[发明专利]一种病原体核酸及耐药性基因检测试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，尤其是一种病原体核酸及耐药性基因检测试剂盒及其应用，具体涉及一种沙眼衣原体/解脲支原体/人型支原体和耐药性基因的试剂盒及其应用。

背景技术

性传播疾病(STD) 是一组全球性传染病，主要通过性接触传播，部分STD 则可通过非性接触传播，比如通过共用针头、哺乳甚至接触传播。

目前STD 在我国的发病率呈不断上升的趋势，其中由沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT) 、人型支原体(M.humenis，MH )和解脲支原体(Ureaplasma urealyticum，UU) 三种病原体引起的泌尿生殖道感染，已成为医院妇科、皮肤性病科、泌尿生殖科的常见疾病，为我国重点防治的对象。

沙眼衣原体（CT）是一类在细胞内寄生的微生物，革兰氏阴性。目前发现它有 15 个血清型，不同的血清型能引起不同的疾病。沙眼衣原体可以引起沙眼、包涵体包膜炎、泌尿生殖道感染、性病淋巴肉芽肿等疾病。非淋菌性尿道炎（NGU）的40%～50%是由沙眼衣原体感染引起的；为全国监测病种。

解脲支原体（UU）是脲原体属中的一种，是人类泌尿生殖道常见的寄生菌之一，是非淋球菌性尿道炎（NGU）的常见病原体之一。解脲支原体多寄生在男性尿道、阴茎包皮和女性阴道。若上行感染，可引起男性前列腺炎或附睾炎、女性阴道炎、宫颈炎，并可感染胎儿导致流产、早产及低体重胎儿，也能引起新生儿呼吸道和中枢神经系统的感染。

人型支原体(MH) 是支原体的一种，寄居于人的泌尿生殖道，是引起泌尿生殖道感染，尤其是女性泌尿生殖道感染的常见病原之一，可引起女性盆腔炎、肾盂肾炎、阴道炎等疾病。

近年来由于支原体衣原体引起的生殖道感染等疾病逐年增加，加上不规范治疗和盲目用药，耐药菌株不断增加，对各种抗菌药物的敏感性均显著降低，疗效也逐渐下降，抗生素的耐药性问题日益突出。耐药菌的快速准确的检测，在合理使用抗生素及减少耐药性发生和传播等方面有重要意义。其中四环素类耐药尤为严重。

培养法

目前，临床上人型支原体(MH)、解脲支原体(UU)及沙眼衣原体（CT）及耐药性检测方法主要是病原体的分离培养。但培养法检测耗时长，一般需经48-72 小时才能得到结果；灵敏度低，受采集、运送、保存等影响较大，容易出现假阴性结果；操作烦琐，导致各种操作的结果判别标准难以统一，需要的技术和设备要求高。免疫学方法相比培养法有了长足的进步，但是因为生殖道微生物之间存在的交叉反应使得该方法的特异性受到影响，容易出现假阳性反应，给治疗带来误判的可能。病原体的多重实时荧光定量PCR检测可以快速准确的确定病原体种类及耐药性基因，可在临床上作为早期快速诊断的方法，给病原体的用药选择及用药后监控，提供有力的技术支撑。目前临床上还没有相关同时检测病原体与耐药性基因的产品。

荧光定量PCR 检测技术融汇了PCR 的灵敏性、DNA杂交的特异性和光谱技术精确定量的优点，是目前临床检验中认同程度很高的一种检测技术，已广泛应用于科学研究和临床检测。但多重荧光定量PCR 由于其技术难度在临床上的应用才刚刚开始。目前已上市产品中绝大多数为单通道检测，只能进行单重PCR反应，一个PCR反应管一次反应只能检测一种基因或病原体，不能特异地对多个靶标基因或病原体进行检测，且临床上没有相关方法的支原体耐药性检测试剂。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种病原体核酸及耐药性基因检测试剂盒及其应用。

一、本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种病原体核酸及耐药性基因检测试剂盒，该试剂盒包括以下各组组分：

PCR 反应液、酶混合液、沙眼衣原体/解脲支原体/人型支原体/耐药性基因多重反应液；

所述的沙眼衣原体/解脲支原体/人型支原体/耐药性基因多重反应液包括以下组分：

组分（1）：由一对检测沙眼衣原体的引物和一条检测沙眼衣原体的探针组成；其中，两条引物的碱基序列分别为SEQ ID No.1 和SEQ ID No.2 所示；探针的碱基序列为SEQ ID No.3所示，该探针的5′端标记有荧光报告基团，3′端标记有荧光淬灭基团；

组分（2）：由一对检测解脲支原体的引物和一条检测解脲支原体的探针组成；其中，两条引物的碱基序列分别为SEQ ID No.4 和SEQ ID No.5 所示；探针的碱基序列为SEQID No.6 所示，该探针的5′端标记有荧光报告基团，3′端标记有荧光淬灭基团；