[发明专利]高效低毒匹马霉素衍生物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种高效低毒匹马霉素衍生物，分子式为C₃₃H₄₉NO₁₁，结构式如下：

2.权利要求1所述高效低毒匹马霉素衍生物的制备方法，其特征在于：以基因工程改造菌株Streptomyces chattanoogensis QZ01发酵菌体为原料，经菌体处理、有机试剂提取、反相色谱柱层析及高效液相色谱分离获得，具体步骤如下：

A、突变株QZ01的构建：构建P450单加氧酶基因pimG的失活质粒，并通过结合转移失活匹马霉素工业高产菌株Streptomyces chattanoogensis L10中的P450单加氧酶基因pimG，得到突变株QZ01：

B、突变株QZ01的发酵培养：将突变株QZ01的孢子接种于种子培养基中，以220rpm转速、在30℃下、摇床培养24h，得种子培养液；然后将种子培养液按10％接种量接种于发酵培养基中，以220rpm转速、在30℃下、摇床培养5d，得发酵培养液；

C、菌体处理：将突变株QZ01的发酵培养液离心处理，收集发酵菌体，用水洗涤菌体3次，去除洗涤液，将发酵菌体冻干；

D、有机试剂提取：将冻干的发酵菌体用甲醇超声提取3次，每次30min，离心获得提取液，提取液合并，减压浓缩得到粗样a；

E、反相色谱柱层析：将粗样a用重量比1.5-3倍量的甲醇溶解，静置，滤除沉淀物，然后上样于反相色谱柱层析，用体积比为0∶1～1∶0的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液，经HPLC检测，目标化合物由1∶0配比的甲醇水溶液洗脱得到，浓缩目标化合物所在洗脱液，得粗样b；

F、高效液相色谱分离：将粗样b溶于少量甲醇中，经高效液相色谱分离纯化，得到匹马霉素衍生物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤A所述的P450单加氧酶基因pimG的失活是通过将基因pimG的活性位点氨基酸Cys344突变为Ala实现的。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤B所述的种子培养基配方为葡萄糖1.75％，胰蛋白胨1.5％，氯化钠1.0％；发酵培养基配方为葡萄糖6.0％，酵母提取物0.7％，黄豆饼粉2.8％。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤E所述的用体积比为0∶1～1∶0的甲醇水溶液进行梯度洗脱，甲醇水溶液的体积比梯度依次为0∶1、3∶7、4∶6、6∶4、1∶0。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤F所述的高效液相色谱分离纯化是以甲醇与0.1％甲酸水溶液为流动相，甲醇与0.1％甲酸水溶液的体积比为54∶46，以流速为3ml/min，250mm×10mm的BDS HYPERSIL C18反相半制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为303nm，每次进样50～100μl，收集对应色谱峰，多次累加后蒸干。

7.权利要求1所述高效低毒匹马霉素衍生物在制备抗真菌药物及食品防腐剂中的应用。