[发明专利]一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明属于益生菌筛选技术领域，具体涉及一种枯草芽孢杆菌菌株及其应用。 

背景技术

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在细菌分类上隶属于厚壁菌门(Firmicutes)(低G+C革兰氏阳性菌)、芽孢杆菌纲(Bacilli)、芽孢杆菌目(Bacillales)、芽孢杆菌科(Bacillaceae)、芽孢杆菌属(Bacillus)。枯草芽孢杆菌普遍存在于土壤及植物体表，也是人、动物肠道内常见的共生菌之一。枯草芽孢杆菌是1989年美国食品药物管理局(FDA)和美国饲料公定协会(AAFCO)公布的44种“可直接饲喂且通常认为是安全的微生物”之一，也是2008年12月我国农业部1126号公告《饲料添加剂品种目录》中规定的16种可以直接饲喂动物的饲料级微生物添加剂菌种之一。由于枯草芽孢杆菌具有非致病性、分泌蛋白能力强的特性和良好的发酵基础，所以应用十分广泛。 

枯草芽孢杆菌是革兰氏阳性细菌，能形成芽孢。通过对菌体进行促芽孢或微胶囊包被处理后，枯草芽孢杆菌稳定性好，耐氧化、耐挤压、耐高温、耐酸碱，作为饲料微生物可以100％活菌状态到达肠道，因此当前以饲料添加剂在水产养殖中的应用最多。枯草芽孢杆菌进入动物肠道后，能迅速定植，形成微生物膜，构成肠道生物屏障，阻碍病菌的人侵和定植。枯草芽孢杆菌在动物肠道内的繁殖还可以产生大量乳酸、乙酸，降低肠内pH，维持正常的肠蠕动并使致病菌被排出体外。枯草芽孢杆菌属于安全、有益的微生物，在水产动物养殖生产中有很好的应用前景。 

但目前对虾养殖生产中应用的枯草芽孢杆菌菌株较少，且存在着菌种生物学性状平平，活菌数量偏低，作用效果不稳定等不足，特别是还没有抗对虾病毒病菌株的应用。病毒性疾病是危害对虾养殖生产的主要病害，约占对虾病害总损失率的六成，特别是对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus，简称WSSV)引起的白斑病，由于宿主范围广、感染死亡率高，是我国乃至全世界影响最大、危害最为严重的病毒性疾病。本发明涉及的短小芽孢杆菌菌株，优先考虑菌株的抗病毒活性，通过反复养殖实验证实该菌株可提高对虾蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性，促进对虾消化能力和饲料养分的消化，提高对虾抗应激反应能力，从而有效阻断病毒病的发生与流行。另外，目前对虾养殖生产中应用的枯草芽孢杆菌菌株大多 是来源于陆生动物的成熟菌株，更适合陆生动物的消化道环境。本发明涉及的枯草芽孢杆菌分离自健康对虾的消化道，相比于外来菌株在其自身内外环境更容易形成优势，特别是在对虾消化道具有更优越的定植能力，从而改善对虾消化道优势菌群的组成和数量，形成并维持良好的消化道微生态平衡，通过营养竞争、空间竞争或分泌细菌素等抵御病毒在消化道的黏附和增殖。 

发明内容

本发明的目的是提供一种枯草芽孢杆菌及其应用，该菌株来源于对虾消化道，具有增强对虾细胞和体液的免疫水平，特别是提高对虾抗病毒感染能力的生物学活性，从而弥补现有技术的不足。 

本发明的枯草芽孢杆菌LV023(Bacillus subtilis LV023)菌株于2013年6月16日保藏在位于武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M 2013264。 

枯草芽孢杆菌LV023菌株可用于制备发酵菌液。 

枯草芽孢杆菌发酵菌液制备方法如下：从-80℃保存的菌种挑取少量划线于2216E固体培养基，在37℃培养24h获得单菌落，取一单菌落接种于2216E培养液中，37℃摇瓶培养24h获得种子液，再把种子液接种于地衣芽孢杆菌发酵液中发酵培养，发酵温度控制在28℃；当发酵液OD600值达到1.2～1.4时，终止发酵，获得发酵菌液；发酵液中枯草芽孢杆菌LV023活菌浓度≥10⁹CFU/mL。 

枯草芽孢杆菌LV023的发酵液成分质量百分比为：蛋白胨，1.0％；酵母粉，0.2％；蔗糖，1.0％；氯化钠，3.0％；硫酸铁，0.001％；硫酸镁，0.005％。