[发明专利]一种淀粉糖原的合成方法

权利要求书

1.一种淀粉糖原的合成方法，其特征在于包括聚合度均一化底物糊精的制备、灌浆期糯米淀粉分支酶的筛选、淀粉糖原的酶法合成步骤；以聚合度DP10-20的糊精和A链DP10-20糯米淀粉为底物，利用从灌浆期糯米籽粒胚乳中提取的淀粉分支酶的转糖基作用来催化转化底物，将糊精接到糯米淀粉分支上，合成短链DP10-20、高分支化类似动物糖原的植物性淀粉糖原产品。

2.根据权利要求1所述的淀粉糖原的合成方法，其特征在于具体步骤为：

（1）底物的制备与选择：选取A链DP10-20的糯米淀粉和DP10-20直链糊精为底物；聚合度均一化的DP10-20直链糊精，由木薯淀粉经过醇酸降解，6000Da的聚乙二醇逐步沉淀分级得到；

（2）灌浆期糯米籽粒淀粉分支酶的提取：采用的淀粉分支酶由灌浆12-15天的传统糯米籽粒胚乳中提取获得；称取50g灌浆12-15天的传统糯米籽粒，加入150mL的50mM、pH 7.4的Tris-HC缓冲液，经匀浆、过滤、离心后获得粗酶液，并进一步过DEAE柱、Toyopearl HW-55F柱，收集活性成分并用SDS-PAGE电泳鉴定酶的组成与纯度，于4℃下储存，备用；

（3）淀粉糖原的合成：称取A链DP10-20的糯米淀粉和DP10-20直链糊精，质量比1:1～1:2，总共10g，分散于100mL的50mM pH 7.4的Tris-HCl缓冲液中，沸水浴中加热20min至完全糊化，冷却至37℃，加入600U淀粉分支酶，于37℃振荡水浴中反应6h；沸水浴10min灭酶，3000g离心5min，去掉沉淀，清液用5倍体积的无水乙醇沉淀，5000g下离心15min；沉淀用乙醇反复洗涤三次，于40℃烘箱中过夜，干燥、粉碎得到产品淀粉糖原。

3.根据权利要求1或2所述的淀粉糖原的合成方法，其特征在于所得到的淀粉糖原产品平均分子量为10⁵ Da数量级，分散系数小于1.4，侧链链长DP10-20，呈非晶簇状，具有与动物糖原相似的结构与空间多维包埋能力。