[发明专利]通过脊椎动物细胞位点特异性并入非天然氨基酸

权利要求书

1.一种脊椎动物细胞或细胞系，其包含正交氨酰基-tRNA合成酶(O-RS)，其中所述O-RS在所述脊椎动物细胞中优先利用对乙酰基-苯丙氨酸(PAF)将正交tRNA(O-tRNA)氨酰化。

2.根据权利要求1所述的细胞或细胞系，其中所述O-RS利用PAF将所述O-tRNA氨酰化，这比所述O-RS利用天然氨基酸将所述O-tRNA氨酰化有效至少10倍。

3.根据权利要求1所述的细胞或细胞系，其中所述O-RS是得自非脊椎动物生物体。

4.根据权利要求3所述的细胞或细胞系，其中所述非脊椎动物生物体为大肠杆菌(Escherichia coli)或嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)。

5.根据权利要求1所述的细胞或细胞系，其中所述脊椎动物细胞或细胞系为哺乳动物的。

6.根据权利要求5所述的细胞系，其中所述脊椎动物细胞系为人类细胞系。

7.根据权利要求1所述的细胞或细胞系，其中与天然氨基酸相比，所述O-RS具有一个或多个改进或增强的关于至少一个非天然氨基酸的酶特性，所述特性选自由以下组成的群组：较高K_m、较低K_m、较高k_cat、较低k_cat、较低k_cat/k_m和较高k_cat/k_m。

8.根据权利要求1所述的细胞或细胞系，其中所述O-tRNA是得自非脊椎动物生物体。

9.根据权利要求8所述的细胞或细胞系，其中所述非脊椎动物生物体为大肠杆菌或嗜热脂肪芽孢杆菌。

10.根据权利要求1所述的细胞或细胞系，其另外包含包括编码所关注多肽的多聚核苷酸的核酸，其中所述多聚核苷酸包含由所述O-tRNA所识别的选择性密码子。

11.根据权利要求10所述的细胞或细胞系，其中所述选择性密码子选自由以下组成的群组：琥珀密码子、赭石密码子、蛋白石密码子或者四个或四个以上碱基的密码子。

12.根据权利要求10所述的细胞或细胞系，其中所述选择性密码子为琥珀密码子。

13.根据权利要求10所述的细胞或细胞系，其中所述选择性密码子为赭石密码子。

14.根据权利要求10所述的细胞或细胞系，其中所述选择性密码子为蛋白石密码子。

15.根据权利要求10所述的细胞或细胞系，其中所述选择性密码子含有四个或四个以上碱基密码子。

16.根据权利要求10所述的细胞或细胞系，其中所述包含所述至少一个非天然氨基酸的所关注多肽的产率为从所述多聚核苷酸缺乏所述选择性密码子的细胞获得所关注天然存在的多肽的产率的至少5％。

17.根据权利要求1所述的细胞或细胞系，其中所述细胞在不存在所述至少一个非天然氨基酸的情况下以一定产率产生所述所关注多肽，所述产率为在存在所述至少一个非天然氨基酸的情况下所述多肽产率的不到30％。

18.根据权利要求10所述的细胞或细胞系，其中所述所关注多肽为治疗性蛋白质、诊断性蛋白质、工业酶或其部分。