[发明专利]森林脑炎抗体的检测试纸、试纸制备方法及其检测试剂盒

权利要求书

1.一种森林脑炎抗体检测试纸，由样品垫、Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫、硝酸纤维素膜、吸水垫依次搭接并贴在底衬卡组成，所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫为固定有金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)标记磁性纳米颗粒的玻璃纤维膜；所述硝酸纤维素膜设有检测带和质控带，所述检测带包被有与森林脑炎抗原；所述质控带包被能与SPA结合的抗体。

2.如权利要求1所述的检测试纸，其特征在于，所述Fe₃O₄磁性纳米颗粒的粒径为5nm～500nm。

3.如权利要求1所述的检测试纸，其特征在于，所述森林脑炎抗原的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一种森林脑炎抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，该方法包括：

(1)、利用森林脑炎抗原的基因序列如SEQ ID NO.1所示制备森林脑炎抗原；

(2)、SPA标记羧基化处理的Fe₃O₄磁性纳米颗粒，喷涂于玻璃纤维膜上，制备Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫；

(3)、包被硝酸纤维素膜，将步骤(1)获得的森林脑炎病毒重组蛋白抗原和羊抗兔IgG分别包被于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带；

(4)、处理样品垫；

(5)、试纸条的组装：将步骤(4)处理后的样品垫、步骤(2)SPA标记的Fe₃O₄磁性纳米颗粒载体垫、步骤(3)包被后的硝酸纤维素膜、吸水垫依次贴在底衬卡上，获得森林脑炎抗体检测试纸。

5.如权利要求4所述森林脑炎抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)处理样品垫步骤为：将含有体积比0.5％～2％的吐温20、pH＝7.2～7.6的PBS，喷涂于样品垫上，烘干或自然干燥后待用。

6.如权利要求4所述森林脑炎抗体检测试纸的制备方法，其特征在于，所述步骤(5)中吸水垫为吸水纸或纯棉绒浆滤纸。

7.一种森林脑炎病毒抗体检测试剂盒，该试剂盒包括，如权利要求1-3中任一所述的检测试纸和辣根过氧化物酶底物。

8.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶底物为邻苯二胺(OPD)体系、四甲基联苯胺(TMB)体系、3.3－二氨基联苯胺(DAB)体系或2.2'-边氮基-双3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸(ABTS)体系中的任一种。

9.如权利要求8所述的检测试剂盒，其特征在于，所述四甲基联苯胺体系包括：四甲基联苯胺和过氧化氢，所述四甲基联苯胺的质量浓度为0.01mg/ml～10mg/ml，所述过氧化氢的摩尔浓度为0.25m mol/L～1.2mmol/L。

10.如权利要求9所述的检测试剂盒，其特征在于，所述四甲基联苯胺体系配制方法如下：a)先将四甲基联苯胺溶于二甲基亚砜，再将加入蒸馏水定容，获得A液；

b)先配制质量浓度为0.5％～30％的过氧化氢尿素溶液，之后称取柠檬酸、磷酸氢二纳，加入过所述氧化氢尿素溶液，用蒸馏水定容，所述柠檬酸的终浓度为0.1mol/L、所述磷酸氢二纳的终浓度为0.2mol/L，所述过氧化氢尿素的摩尔浓度为0.5m mol/L～2.4m mol/L，获得B液；

c)将上述A液与B液等体积混合获得TMB应用液备用。