[发明专利]一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法

说明书

技术领域

本发明属于菌类培养技术领域，尤其是一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法。

背景技术

枯草芽孢杆菌在水体中繁殖的过程中能够产生胞外酶，它能够将水体和底泥中的残余饵料、排泄废物和动植物残体等有机物分解，这些有机物首先分解为小分子，如高级脂肪酸和多肽等，然后分解为更小的分子有机物，如单糖、氨基酸、低级脂肪酸和环烃等，最终分解为二氧化碳、硝酸盐、硫酸盐等，最终降低了水中的BOD、COD，使水中的氮、氨、硫化物和亚硝酸氮的浓度降低，具有清除底泥和减轻水体富营养化的作用，此外芽孢杆菌分泌的多种抗生素和酶类都能抑制其它病原菌的生长。

枯草芽孢杆菌作为水产养殖用添加剂，一些研究证明其能够促进养殖品种加速生长，降低饲料系数，维持肠道微生态平衡，增强动物机体免疫力，提高抗病能力和减少污染等。

目前国内对枯草芽孢杆菌的研究主要集中在筛菌、抑菌效果以及枯草芽孢杆菌的产酶特性等，而对于高密度培养枯草芽孢杆菌的发酵技术则报道较少。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，而提出一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法。

本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：

一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，包括步骤如下：

(1)以枯草芽孢杆菌为发酵菌种进行三级种子活化，

其中，活化培养基的组份包括：蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖1g/L；

三级种子活化培养条件均为：摇床培养、PH值7.5、温度为30℃、时间24h；

(2)将活化后的菌种接种到发酵培养基中培养，

其中，发酵培养基的组份包括：葡萄糖10g/L、豆饼粉15g/L、MnSO₄0.3g/L、NaCl5g/L、K₂HPO₄0.3g/L、碳酸钙5g/L；

发酵条件为：pH自然、培养温度30℃、搅拌转速200r/min、培养时间48h后，得高密度培养的枯草芽孢杆菌。

而且，所述步骤(1)中三级种子活化培养的接种量均为8％v/v。

而且，所述步骤(2)中发酵培养的接种量为8％v/v。

而且，所述步骤(2)中发酵培养时，每发酵10L体积的通氧量大于0.5m³/h。

本发明的优点和积极效果是：

1、本发明通过对培养基配方及发酵条件的改进，为提高枯草芽孢杆菌的菌体量、提高产品有效率提供了基础条件。

2、使用本发明方法后，枯草芽孢杆菌的活菌数显著提高，达到8.9×10⁹cfu/mL以上，比优化前的1.8×10⁹cfu/mL活菌数提高了4.9倍，显著的提高了产量。

具体实施方式

以下对本发明实施做进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。

一种高密度培养枯草芽孢杆菌的方法，包括步骤如下：

(1)以枯草芽孢杆菌为发酵菌种进行三级种子活化，

其中，活化培养基的组份包括：蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖1g/L；

三级种子活化培养条件均为：摇床培养、PH值7.5、温度为30℃、时间24h、接种量8％(v/v)。

(2)对活化后的菌种接种到发酵培养基中培养，

其中，发酵培养基的组份包括：葡萄糖10g/L、豆饼粉15g/L、MnSO₄0.3g/L、NaCl5g/L、K₂HPO₄0.3g/L、碳酸钙5g/L；

发酵条件为：pH自然、培养温度30℃、搅拌转速200r/min、接种量为8％(v/v)，培养时间48h，得高密度培养的枯草芽孢杆菌。

实例1：

(1)种子培养：

种子活化采用的培养基组成如下：蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化钠5g/L、葡萄糖1g/L。

活化培养的条件为：摇床培养；PH值7.5；温度为30℃；时间24h，接种量8％(v/v)。

(2)发酵培养：

将活化好的枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基中培养，发酵体积为30L。