[发明专利]用于获取多器官和组织细胞外基质的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.用于获取多器官和组织细胞外基质的试剂盒；其特征在于：包括非离子去垢剂、离子去垢剂Ⅰ、离子去垢剂Ⅱ、高渗溶液、低渗溶液、等渗溶液、核酸去除剂和组织疏松剂；

所述的非离子去垢剂采用的溶质为TritonX-100，溶剂为等渗无菌的PBS缓冲溶液，其体积比为0.1%～10%；

所述的离子去垢剂Ⅰ采用的溶质为十二烷基硫酸钠SDS，溶剂为等渗无菌的PBS缓冲溶液，其体积比为0.1%～10%；

所述的离子去垢剂Ⅱ采用的溶质为脱氧胆酸钠，溶剂为等渗无菌的PBS缓冲溶液，其体积比为0.1%～10%；

所述的等渗溶液的浓度为0.01M的PBS缓冲溶液，并经过高温高压灭菌；

所述的高渗溶液浓度为0.2M的PBS缓冲溶液，并经过高温高压灭菌；

所述的低渗溶液浓度为0.005M的PBS缓冲溶液，并经过高温高压灭菌；

所述的核酸去除剂采用的是DNA酶，RNA酶的1:50的混合溶液；

所述的组织疏松剂为由EDTA和胰酶溶于无菌等渗PBS配制，以下为浓度为体积比，其中EDTA浓度为3.2%，胰酶浓度为4%。

2.用于获取多器官和组织细胞外基质的试剂盒的使用方法，其特征在于：

目标对象为神经组织，置于-80℃～-20℃的低温冰箱1～2h，1～2h后在25℃～45℃的等渗溶液中解冻，用等渗溶液或生理盐水冲洗3次，每次持续20分钟，离子去垢剂中I振荡处理4～8h，然后置于高渗溶液中震荡4～8h，核酸酶去除剂处理30min～60min，等渗溶液冲洗2～24h，即可制备得到神经组织类去细胞支架；所述振荡速度为100～300rpm/min，各步骤均连续进行；

目标对象功能型复杂的全器官去细胞的流程，置于-80℃～-20℃的低温冰箱12～48h，12～48h后在25-45℃的等渗溶液中解冻，用等渗溶液或生理盐水冲洗3次，每次持续20分钟，在低渗溶液中灌注组织疏松剂15min～60min，非离子去垢剂中灌注组织疏松剂处理6～24h，然后用低渗溶液中灌注组织疏松剂15min～60min，核酸去除剂处理30min～60min，等渗溶液冲洗2～24h，即可制备得到上述器官的去细胞支架，所述灌注速度为1～500ml/min, 各步骤均连续进行，；

目标对象为功能单一的全器官的去细胞的流程，置于-80℃～-20℃的低温冰箱12～48h，12～48h后在25℃～45℃的等渗溶液中解冻，用等渗溶液或生理盐水冲洗3次，每次持续20分钟，用低渗溶液中灌注组织疏松剂15min～60min，非离子去垢剂中灌注组织疏松剂处理6～24h，核酸去除剂处理30min～60min，等渗溶液冲洗2～24h，即可制备得到上述器官的去细胞支架，所述灌注速度为1～500ml/min,各步骤均连续进行；

目标对象为结缔组织，置于-80℃～-20℃的低温冰箱1～2h，1～2h后在25℃～45℃的等渗溶液中解冻，用生理盐水冲洗3次，每次持续20分钟，在离子去垢剂中振荡处理4～48h，然后置于低渗溶液中震荡4～48h，在离子去垢剂II中再振荡处理4～48h，然后放入低渗溶液中震荡4～48h，核酸去除剂处理60min～120min，无菌等渗PBS冲洗6～24h，即可制备得到上述组织去细胞支架；所述振荡速度为100～300rpm/min，各步骤均连续进行。