[发明专利]β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原及宽谱特异性抗体及其制备

说明书

技术领域

本发明属于免疫化学和分析技术领域，具体涉及一种β-肾上腺素受体激动剂(以下简称β-激动剂)多簇抗原及宽谱特异性抗体及其制备。

背景技术

β-肾上腺素受体激动剂，简称β-激动剂，是动物源性食品中检出率最高、危害最严重的化学性残留危害物，其中最著名的就是克伦特罗(clenbuterol，CL)，俗称“瘦肉精”。上世纪80年代，美国脂胺公司的科研人员意外发现，“瘦肉精”能增强动物脂肪分解，促进蛋白质合成，大大缩短肉品上市周期，显著提高胴体瘦肉率、饲料回报率和经济效益。随后在世界各地迅速推广，80年代后期，传入我国并在许多地区的饲料加工企业和养殖业推广使用，很快成为养殖业应用最广泛的“添加剂”。

“瘦肉精”除克伦特罗外，还包括沙丁胺醇(salbutamol，SAL)、莱克多巴胺(ractopamine，RAC)等20多个结构和性质相类似的化合物。这类化合物进入体内后选择性作用于腺苷酸环化酶，导致人体产生低敏感现象，哮喘发生率和发病程度升高；还可导致内分泌紊乱，诱发染色体畸变及恶性肿瘤，严重时可致人死亡。因此我国和世界上大多数国家都明文禁止“瘦肉精”用作饲料添加剂。

目前，β-激动剂类兽药残留的检测方法主要包括高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用法(LC-MS)、气相色谱-质谱联用法(GC-MS)、酶联免疫法(ELISA)和荧光免疫法(FIA)等。

色谱法是β-激动剂兽药残留的主要检测方法，但是色谱法检测成本高、操作复杂、大量的阴性样品重复检测；而酶联免疫法具有特异性强、样品前处理简单等优点，但特异性强的特点同时也决定了它的致命缺点：一种酶联免疫试剂盒或试纸条只能检测一种兽药残留，而无法检测其它的同类兽药残留，这就是容易出现漏检的原因(如2011年轰动全国的“双汇瘦肉精”事件)；此外，随着β-激动剂多种替代品的出现，如果进行完全检测，一个样品需要使用多种检测产品，大大提高了检测成本和工作时间，失去了快速筛选的意义。

多残留免疫分析能同时检测一类药物残留，其低成本、高通量、快速现场的优点是现有的色谱法和特异性免疫方法无法比拟的，是未来食品安全检测领域的关键技术之一，逐渐引起人们的重视。

发明内容

本发明的目的在于提供一种β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原及宽谱特异性抗体及其制备方法。

本发明采用以下技术方案：

一种β-肾上腺素受体激动剂多簇抗原，其特征在于，所述的多簇抗原是两种以上β-肾上腺素受体激动剂与载体蛋白的偶联物，所述的载体蛋白为牛血清白蛋白或卵清蛋白，所述的β-肾上腺素受体激动剂选自克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺。

本发明所述的多簇抗原是在载体蛋白上，依次偶联两种以上的β-肾上腺素受体激动剂半抗原得到，半抗原选自克伦特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺，其中克伦特罗半抗原采用重氮法偶联，沙丁胺醇和莱克多巴胺采用混合酸酐法偶联。

本发明所述多簇抗原包括八种β-激动剂多簇抗原，具体为克伦特罗-莱克多巴胺-牛血清白蛋白(CL-RAC-BSA)、克伦特罗-沙丁胺醇-牛血清白蛋白(CL-SAL-BSA)、沙丁胺醇-莱克多巴胺-牛血清白蛋白(SAL-RAC-BSA)、克伦特罗-沙丁胺醇-莱克多巴胺-牛血清白蛋白(CL-SAL-RAC-BSA)、克伦特罗-莱克多巴胺-卵清蛋白(CL-RAC-OVA)、克伦特罗-沙丁胺醇-卵清蛋白(CL-SAL-OVA)、沙丁胺醇-莱克多巴胺-卵清蛋白(SAL-RAC-OVA)及克伦特罗-沙丁胺醇-莱克多巴胺-卵清蛋白(CL-SAL-RAC-OVA)。

其中，克伦特罗-沙丁胺醇-牛血清白蛋白(CL-SAL-BSA)或克伦特罗-沙丁胺醇-卵清蛋白(CL-SAL-OVA)是以克伦特罗和沙丁胺醇为半抗原，以牛血清白蛋白或卵清蛋白为载体，按以下步骤制备得到：

1)在牛血清白蛋白或卵清蛋白上以重氮法偶联克伦特罗半抗原，再进行纯化：

将0.2mmol盐酸克伦特罗于溶于1～5ml稀盐酸中，缓慢加入0.2～2mol/L的亚硝酸钠溶液至淀粉碘化钾试纸变为紫色，继续反应1～3h后将反应液缓慢加入到5～10ml含有5～10mg/ml载体蛋白的碳酸钠缓冲溶液中，再继续反应3～5h。将上述反应液用磷酸缓冲溶液透析3～6次，冷冻干燥即可得到克伦特罗-载体蛋白偶联物冻干粉。

2)在步骤1)的产物上以混合酸酐法偶联沙丁胺醇半抗原，再进行纯化：