[发明专利]膜透析-液相色谱串联质谱测定畜产品中多种β-受体兴奋剂残留的方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，涉及畜产品中β-受体兴奋剂的检测方法，具体涉及利用膜透析-高效液相色谱串联质谱法测定畜产品中18种β-受体兴奋剂残留的方法。

背景技术

β-受体兴奋剂是天然的儿茶酚胺类化学合成的衍生物，选择性作用于β-肾上腺受体。欧盟、日本、韩国等国家都规定禁止进口含有此类药物的肉制品。2002年我国农业部公告第176号明确规定盐酸克伦特罗等7种β-受体激动剂为禁用药物，2010年农业部公告第1519号明确规定禁止在饲料和动物饮水中使用苯乙醇胺A等9种β-受体兴奋剂，两个公告共禁用16种β-受体兴奋剂。目前，动物源性食品中β-受体兴奋剂残留的检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、气质联用法和液质联用法等。高效液相色谱串联质谱法因具有抗干扰能力好、灵敏度高、确证能力强等优点, 已成为目前主要的检测和确证方法。

透析（dialysis）是通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。目前透析在医学上和废水处理方面应用较多，应用透析技术与分析仪器结合检测β-受体兴奋剂的方法主要局限于单一药物的检测，例如Gonzalez等（1997）建立了双向渗析膜技术与气质联用仪结合技术检测奶牛肝中盐酸克伦特罗含量，回收率达到99.3%，检测限为250 ppt（P. Gonza′lez, C.A. Fente, C. Franco, B. Va′zquez, E. Quinto, A. Cepeda, Journal of Chromatography B, 693 (1997) 321–326）。Fente等（1999）建立了双向渗析膜技术与气质联用仪结合技术检测肉牛毛中盐酸克伦特罗含量，检出限达5 ng/g, 日内和日间相对标准偏差（RSD）为7.1%和9.5%（C.A. Fente , B.I. Va′zquez, C. Franco, A. Cepeda, P.G. Gigosos,Journal of Chromatography B, 726 (1999) 133–139）。

发明内容

本发明的目的是提供一种可以同时检测畜产品中18种β-受体兴奋剂残留的方法，本发明 18种β-受体兴奋剂是莱克多巴胺(ractompamine  ract)、克伦特罗(clenbuterol  clen)、沙丁胺醇(salbutamol  sal)、溴布特罗(bromburerol  bro )、特布它林(terbutalin  ter)、班布特罗(bambuterol  bam)、喷布特罗(penbutolol  pen) 、非诺特罗(fenoterol  fen) 、齐帕特罗(zilpaterol zil) 、苯乙醇胺A (phenylethanolamine A  phe)、阿福特罗（arformorerol  arf）、西马特罗(cimaterol  cima) 、苯氧丙酰胺(isoxsuprine  iso) 、妥布特罗(tulobuterol  tul) 、西布特罗(cimbuterol  cimb) 、马布特罗(mabuterol  mab) 、氯丙那林(clorprenaline  clo) 、普奈洛尔（Propranolol  pro），该方法样品处理方法简单、灵敏度高、重现性好，应用于畜产品中β-受体兴奋剂残留检测可以缩短检测时间，提高检测效率。

本发明的技术方案是：

一种检测畜产品中18种β-受体兴奋剂残留的方法，其包括步骤：将待测组织样品经过样品预处理后，提取上清液装入透析袋中，将透析袋放入透析液中透析，收集透析液调节PH至9-10后用环己烷和乙酸乙酯的混合液萃取药物样品，萃取液浓缩后用于高效液相色谱串联质谱法测定药物含量；其中，

所述透析袋采用标准再生纤维素膜RC，截留分子量MWCO为1000D；

所述透析液为PH为4-5的乙酸铵缓冲溶液；