[发明专利]基于荧光共振能量转移对硫氰酸根离子进行检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种基于荧光共振能量转移对硫氰酸根离子进行检测的方法，属于分析技术领域。

背景技术

硫氰酸盐是一种用于医疗、印染等多种行业的化工原料，存在于污水、工业废水以及农药残渣中时，对环境、人体都有较大的影响。硫氰酸盐是乳过氧化物酶抗体系重要成分之一，常被用作生鲜乳保鲜剂使用，但硫氰酸盐具有毒性，过量摄入可引起急性中毒；少量摄入可抑制体内碘的转移而造成甲状腺肿。2008年12月12日，卫生部发布的食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第1批）中明确规定乳及乳制品中硫氰酸钠属于违法添加物质。

目前，硫氰酸根的检测方法主要有分光光度法（Spectrophotometry）、气相色谱法（GC）、离子色谱法（Ion Chromatography）、毛细管电泳法（Capillary Electrophoresis）、表面共振能量转移（Surface Resonance Energy Transfer）和荧光法（Fluorometry）等，其中离子色谱法较为常用。尽管这些方法灵敏度高，但样品的前处理步骤较多，相对费时，检测费用较高，而且需要专业人员操作，使得不能广泛应用。目前，我国尚未发布牛奶中硫氰酸根的检验方法标准，因此，需要建立一种快速、简单、灵敏的方法检测牛奶样品中硫氰酸根的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于荧光共振能量转移以快速、简单、灵敏的检测牛奶中的硫氰酸根。将荧光素加入到柠檬酸三钠还原法制备的金纳米（AuNPs）溶液中，荧光素通过共价键作用吸附到金纳米表面，由于荧光素和金纳米之间的荧光共振能量转移而导致荧光素的荧光发生猝灭。当加入硫氰酸根后，硫氰酸根与荧光素竞争结合到金纳米表面，荧光素离开金纳米表面荧光恢复。通过检测金纳米-荧光素体系的荧光恢复率对硫氰酸根进行定量检测。

一种基于荧光共振能量转移对硫氰酸根离子进行检测的方法，具体步骤如下：

（1）金纳米溶液胶的制备：

将所有玻璃器皿洗净，用新制王水浸泡，再用超纯水洗涤后烘干，通过柠檬酸三钠还原法制备金纳米溶液胶：向250 mL三口烧瓶中加入1 mmol/L氯金酸水溶液100 mL充分搅拌下加热至沸腾，搅动下快速加入38.8 mmol/L柠檬酸三钠水溶液，使得金黄色的氯金酸水溶液在２分钟内变为酒红色，继续冷凝回流15 min，自然冷却至室温，即制得金纳米溶胶，4°C下保存备用；

（2）荧光素-金纳米复合物的合成：

把30μL浓度为1.0×10^-5mol的荧光素加入到上述制备好的200μL金纳米溶胶中孵化5-20min，荧光素与金纳米表面的柠檬酸根通过共价偶联作用吸附到金纳米表面，得到荧光素-金纳米复合物，备用；

（3）硫氰酸根离子的检测：

分别把770 μL、0.01 mol/L、 pH6.0-8.0的PBS 缓冲溶液配制的不同质量的硫氰酸钠添加到上述制备的荧光素-金纳米复合物中，使得溶液中硫氰酸根的最终浓度依次分别为：0、1.0、3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0、35.0、40.0、50.0、100.0、200.0 nmol/L，即为硫氰酸根标样，室温下孵化反应10min后对其进行荧光测定，硫氰酸根存在时荧光素-金纳米溶液在531nm处的荧光强度为I_F，硫氰酸根浓度为0时荧光素-金纳米的荧光强度为I₀，根据荧光恢复率 =(I_F-I₀)/I₀与硫氰酸根的浓度建立标准曲线，硫氰酸根的检测限为0.09nM，线性范围为1-40 nmol/L。

（4）实际样品检测：