[发明专利]一种自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法在审
| 申请号： | 201410553407.7 | 申请日： | 2014-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN104977419A | 公开（公告）日： | 2015-10-14 |
| 发明（设计）人： | 李庆春;王洪;孙婵;夏波;马竹凤;柳乐;王秀伟 | 申请（专利权）人： | 苏州浩欧博生物医药有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/96 | 分类号： | G01N33/96 |
| 代理公司： | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人： | 孙仿卫;汪青 |
| 地址： | 215123 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 自身 免疫性 抗原 阳性 血清 纯化 制备 方法 | ||
1. 一种自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，包括用自身免疫性抗原对健康动物进行免疫、采血后获得抗血清的步骤和对所述的抗血清进行纯化获得阳性血清的步骤，其特征在于：所述的纯化的具体方法为：
对所述的抗血清进行亲和纯化得到抗体IgG；将所述的抗体IgG和人源IgG Fc或人源IgM Fc或人源IgA Fc按质量比为1:1～2偶联后，经分离纯化获得IgG-IgG Fc连接物浓溶液或IgG-IgM Fc连接物浓溶液或IgG-IgA Fc连接物浓溶液，将所述的IgG-IgG Fc连接物浓溶液或所述的IgG-IgM Fc连接物浓溶液或所述的IgG-IgA Fc连接物浓溶液稀释至浓度为0.5～1μg /ml，即得所述的阳性血清。
2. 根据权利要求1所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：采用琼脂糖亲和介质或者采用免疫亲和层析柱进行所述的亲和纯化。
3. 根据权利要求2所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的琼脂糖亲和介质为Protein-A sepharose CL-4B。
4. 根据权利要求2所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的免疫亲和层析柱为所述的自身免疫性抗原与琼脂糖凝胶连接成的亲和层析柱。
5. 根据权利要求2或4所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的抗血清先经过硫酸铵处理后，再采用所述的免疫亲和层析柱进行所述的亲和纯化。
6. 根据权利要求1所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的人源IgG Fc或人源IgM Fc或人源IgA Fc，是将人源IgG或人源IgM或人源IgA溶解在木瓜蛋白酶消化液中，再用木瓜蛋白酶进行消化，然后用碘乙酰胺终止消化反应后，用琼脂糖亲和介质提取获得的。
7. 根据权利要求1所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的IgG抗体和所述的人源IgG Fc或人源IgM Fc或人源IgA Fc通过2-亚胺四氢噻吩偶联剂或4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯偶联剂活化后，在pH7.2～7.4的条件下进行所述的偶联。
8. 根据权利要求7所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：所述的2-亚胺四氢噻吩偶联剂的浓度为9～11mg/ml，所述的4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯偶联剂的浓度为4～6mg/ml。
9. 根据权利要求1所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：采用Sephadex 200凝胶纯化柱进行所述的分离纯化。
10. 根据权利要求1所述的自身免疫性抗原阳性血清的纯化制备方法，其特征在于：采用含质量比为0.4～0.6%的牛血清白蛋白、pH7.5～8.5、0.09～0.11mol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液将所述的IgG-IgG Fc连接物浓溶液或IgG-IgM Fc连接物浓溶液或IgG-IgA Fc连接物浓溶液进行所述的稀释。
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