[发明专利]具有蛋白增色增敏效应的硫醇衍生化纳米金材料的制备

说明书

技术领域

本发明属材料科学领域，具体涉及一种具有蛋白增色增敏效应硫醇衍生化纳米金材料的制备方法和检测结果。 

背景技术

纳米金作为一种特性优良的纳米材已在在药物靶向传输体系、疾病检测、分子识别、生物标签等领域有着广泛的应用，其中纳米金粒子的大小是影响其应用一个重要的因素，直径越小纳米金粒子的研究已经成为研究的热点。但是，由于纳米金由于其表面效应，随着纳米金粒子直径的减小，其表面原子数所占数量的比例逐渐增加，表面原子的巨大剩余成键能力使得纳米金粒子较容易团聚、沉聚，使得纳米金粒子很不稳定，因而影响在需要更高检测灵敏度生物检测领域中应用。本发明提供了一种硫醇衍生化纳米金材料的制备和蛋白增色增敏效应检测方法，通过蛋白增色增敏效应检测发现新制备的材料可以满足需要更高检测灵敏度的生物检测领域的要求。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种硫醇衍生化纳米金材料的制备和蛋白增色增敏效应检测方法，其具体的硫醇衍生化纳米金材料的制备步骤如下： 

1)制备纳米金；采用柠檬酸三钠还原法制备纳米金。取氯金酸水溶液，加热至沸腾搅动下准确加入质量分数为1％的柠檬酸三钠，继续煮沸，直至溶液颜色由橙黄色变为酒红色停止加热。自然冷却至室温并以蒸馏水恢复到原来的体积,置于4℃冰箱保存备用。 

2)制备硫醇衍生化纳米金粗液；取纳米金溶液，向其中加入一定浓度的乙二硫醇的四氢呋喃溶液，搅拌溶液过夜后离心过滤去除溶液中游离的配体分子，既得硫醇衍生化纳米金粗液。 

3)将硫醇衍生化纳米金粗液进一步分散于双蒸水中，在超声波清洗器中进行清洗的即制得硫醇衍生化纳米金，所制备的纳米金结构如图1所示。 

具体的蛋白增色增敏效应检测方法 

在一定浓度的蛋白溶液中加入相同体积的硫醇衍生化纳米金和纳米金溶液，分别采用紫外 -可见光分光光度仪、荧光分光光度仪以傅里叶变换红外光谱仪对它们的混合样品进行检测，紫外-可见光分光光度仪、荧光分光光度仪以傅里叶变换红外光谱仪检测结果分别如图2，图3和图4所示。 

附图说明：

图1 纳米金结构示意图 

图2 CEA与纳米金及CEA与硫醇衍生化纳米金相互作用的紫外-可见光图；其中曲线1:CEA蛋白与纳米金相互作用的紫外-可见吸收曲线，曲线2：CEA与硫醇衍生化纳米金相互作用的紫外-可见吸收曲线 

图3 CEA与纳米金及CEA与硫醇衍生化纳米金相互作用的荧光发射谱图；其中曲线1:CEA蛋白与纳米金相互作用的荧光发射曲线，曲线2：CEA与硫醇衍生化纳米金相互作用的荧光发射曲线 

图4 CEA与纳米金及CEA与硫醇衍生化纳米金相互作用的红外光谱图；其中曲线1:CEA蛋白与纳米金相互作用的红外透射曲线，曲线2：CEA与硫醇衍生化纳米金相互作用的红外透射曲线 

具体实施方式

硫醇衍生化纳米金材料制备的具体实施方案 

1)制备纳米金的具体过程为，在一清洁的200ml的烧杯中用一清洁的量筒量取100ml质量分数为0.01％的氯金酸水溶液，在加热搅动至沸腾后，用另一个容量为5ml的清洁量筒量取2ml质量分数为1％的柠檬酸三钠加入氯金酸溶液中，继续煮沸和搅拌15min，直至溶液颜色由橙黄色变为酒红色停止加热，在磁力搅拌下自然冷却，再加入蒸馏水恢复到原来的体积，置于4℃冰箱保存备用。 

2)取一个容量为10ml的清洁量筒量取10ml纳米金溶液加入容量为50ml的洁净烧杯中，向其中加入10ml浓度为1mmol/L的乙二硫醇的四氢呋喃溶液，放在磁力搅拌器上搅拌溶液过夜。 

3)将过夜后的溶液缓慢转移到漏斗中过滤，并用双蒸水清洗三次。 

4)用20ml双蒸水将滤纸上的留下的物质冲洗到一个洁净的烧杯中，制得硫醇衍生化纳米金 粗液。 

5)将制得硫醇衍生化纳米金粗液放在超声波仪中进一步分散，得到硫醇衍生化纳米金分散液。 

蛋白增色增敏效应检测方法的具体实施方案 

1)配制浓度为80ng/ml的癌胚抗原蛋白溶液。 

2)在U-2910型(HITACHI，High-Technologies Corporation)紫外-可见光分光光度仪的比色皿中加入2ml癌胚抗原蛋白溶液，然后分别加入1ml的纳米金和硫醇衍生化纳米金溶液，采用光谱扫描的方法，检测它们在200nm-800nm波长范围内的吸光度曲线并进行分析比较。