[发明专利]同步定量联检畸胎疾病多指标的量子点标记试条及其方法

说明书

技术领域

本发明属于体外诊断领域，具体涉及一种同步定量联检畸胎疾病多指标的量子点标记试条及其方法。

背景技术

巨细胞病毒(HCMV)、单纯疱疹病毒(HSV)、风疹病毒(RV)和弓形虫(TOX)是畸胎疾病的最可能病原体。孕妇如果患有上述病原物所致疾病中的一种，有可能导致流产、死胎、胎儿畸形等，或出现婴儿智力低下、视听障碍等远期后遗症。其中，人巨细胞病毒为“祸首”，它侵入人体后可无任何临床表现，目前国内外对此尚无安全有效防治措施。因此，对上述病原物的检查已成为孕妇身体检查的必检项目。

目前，对上述病原物的诊断大多采用酶联免疫吸附法(ELISA)。该方法需要离心机先分离血清，还需要孵育箱、酶标仪等医疗设备，操作过程复杂，每次只能检测一种指标，不能随时随地检测，检测过程至少需要40-60分钟，且价格昂贵。

样品多种组分同步检测具有非常重要意义。传统上测定混合体系中样品多种组分含量，多采用平行单组分分析法，即每个分析流程只测定其中一种组分含量，多次平行执行该流程，最后得到所有所需组分含量。分析所需时间长，消耗试剂多，分析通量低，劳动量大。量子点（quantum dot, QD）荧光发光效率高，激发谱线范围宽，能“一元激发，多元发射”，发射谱线范围窄且对称，光漂白速度慢，荧光寿命长，粒径与生物分子相近，表面修饰后能多功能化，不同粒径和种类的量子点混合物产生的特征波长荧光光谱不交叠，非常适用于样品多组分分析。本发明公开一种同步定量联检畸胎疾病多指标的QD标记试条及其方法，以解决胎儿致畸疾病4指标（HCMV-Ab、HSV-Ab、RV-Ab、TOX-Ab）同步快速定量问题。

发明内容

本发明的第一个目的是公开一种同步定量联检畸胎疾病多指标的量子点标记试条。本发明的第二个目的是公开所述试条的制备方法、标准曲线制作方法、以及用所述试条同步定量畸胎疾病多指标的方法。

本发明上述目的是通过如下技术方案实现的：

所述的同步定量畸胎疾病多指标的量子点标记试条，包括顺次搭接固定在底衬8上的样品垫1、红细胞滤膜2、标记垫3、分析膜7、吸水垫6。

所述标记垫3为玻璃纤维膜。所述分析膜7为硝酸纤维素膜、尼龙膜、或硝酸纤维素/醋酸纤维素混合膜，其上具有检测带（即T带）4和质控带（即C带）5。所述底衬8为聚脂或塑料板。

所述标记垫3包被有不同波长量子点对应标记的HCMV-Ag、HSV-Ag、RV-Ag、TOX-Ag、鼠抗体的混合物。所述分析膜7的T带4包被有HCMV-Ag、HSV-Ag、RV-Ag、TOX-Ag的混合物。所述分析膜7的C带5包被有二抗质控物羊抗鼠抗体。

本发明所述试条的标记垫3的量子点包括ZnS、CdS、HgS、ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag₂S、CdS/PbS、CdS/Cd(0H)₂、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、SrS、SrSe、SeTe、BaS、BaSe、BaTe、CdS:Mn、ZnS:Mn、CdS:Cu、ZnS:Cu、CdS:Tb、ZnS:Tb中的任意一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核-壳型纳米复合粒子。

本发明所述同步定量联检畸胎疾病多指标的量子点标记试条的制备方法包括下述步骤： 

A. 量子点偶联抗原/抗体：

a) 取不同波长量子点分别用磷酸缓冲液（PBS）调pH=6-9，加入EDC（l-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二胺盐酸盐）和NHS（N-羟基硫代琥珀酸亚胺）室温活化10-60min。

b) 分别对应加入HCMV-Ag、HSV-Ag、RV-Ag、TOX-Ag、鼠抗体旋涡振荡反应0.5-3h。

c) 分别对应加入BSA封闭反应0.5-2h。

d) 离心纯化产物。

e) 取沉淀用PBS缓冲液重悬分散，4℃保存。