[发明专利]一种灰葡萄孢的早期快速分子检测方法有效
| 申请号： | 201410543134.8 | 申请日： | 2014-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN104293957B | 公开（公告）日： | 2017-06-16 |
| 发明（设计）人： | 程家森;李斌;姜道宏;付艳苹;谢甲涛;李国庆 | 申请（专利权）人： | 华中农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所42001 | 代理人： | 王敏锋 |
| 地址： | 430070 *** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 葡萄 早期 快速 分子 检测 方法 | ||
1.一种灰葡萄孢的早期快速分子检测方法，其步骤是：
(1)通过RAPD方法扩增获得的灰葡萄孢特异性片段为靶标，利用在线软件Primer Explorer 5.0设计LAMP引物，每一组LAMP引物包括两条外引物F3，B3，上游内引物FIP，下游内引物BIP，所述的2对特异性引物的序列分别是：
BC-F3：5’-AATGATCGCCTACACAGC-3’
BC-B3：5’-AGCTACCACCGAGAACAA-3’
BC-FIP：5’-TCCCCTTAATAAATGTGATAGGCACCTGAACCGAAAGATTGAAAAGG-3
BC-BIP：5’-TTAAGTGACACTTGATGAACGGATCGTTTTATAATCACGAATATGACAG-3’；
(2)利用步骤(1)的引物在恒温条件下，进行LAMP扩增，取5μL产物于2.0％质量体积比的琼脂糖凝胶电泳分析或用染料法进行观察；
(3)进行结果判断，观察电泳结果是否有梯形条带出现或加入染料后产物是否为绿色，有梯形条带出现或产物为绿色，DNA来源为灰葡萄孢，没有梯形条带出现或产物不变色，DNA来源不是灰葡萄孢。
2.根据权利要求1所述的一种灰葡萄孢的早期快速分子检测方法，其特征在于，所述的LAMP反应体系及条件是：
25μL的LAMP的反应体系：
反应程序为：64℃45min，85℃5min。
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