[发明专利]一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医学检验测定技术领域，具体涉及一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒。

背景技术

α-L岩藻糖苷酶(α-L-Fucosidase，AFU)，是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布于人体内的各种组织、细胞和体液中，尤其以肝、肾等组织活性较高。AFU作为溶酶体酸性水解酶，能水解含有岩藻糖的脂质、粘蛋白和粘多糖，AFU试剂正是利用这一特性对其活力进行检测。1977年，Bauer等在动物实验中观察到Morris鼠肝癌组织中AFU活力较正常肝脏高7倍，且与肿瘤长期相关。1984年Deugnier等发现，肝细胞癌患者血清中AFU升高，提出把AFU作为诊断肝癌的一种新的标志酶，并被后续研究证实肝癌与AFU活力的相关性。近年来，随着AFU检测方法研究及其他肿瘤或非肿瘤性疾病的血清AFU水平变化的研究深入，岩藻糖苷酶活力测定已经成为一个基本诊断指标，并与其他实验室指标相结合，成为肝癌、胃癌、胰腺癌、结肠癌、口腔癌、白血病、卵巢肿瘤等疾病诊断的重要指标，大大提高了相关疾病诊断的准确率及预后效果的评价，体现出良好的临床诊断价值。

AFU检测试剂盒目前在国外已广泛应用于癌症诊断，尤其是原发性肝癌的早期筛查。AFU与AFP，两项指标联合检测，起到优势互补作用，阳性检出率可达到95％左右，有助于原发性肝癌的诊断、病情变化判别及治疗效果观察，从而弥补了AFP在原发性肝癌诊断上的缺陷。AFU试剂除了作为原发性肝癌的标志物之一，近年来已逐渐作为重要或辅助结合指标，应用于胃癌、胰腺癌、结肠癌、口腔癌、白血病、卵巢肿瘤等疾病的诊断检测。由此可见，AFU活性检测今后将发展成为一个市场容量大、应用范围广的诊断指标。

目前，测定AFU活力的方法主要有荧光法、终点比色法、速率法。

(1)荧光法：是利用岩藻糖苷化合物在岩藻糖苷酶水解后，释放出可发射荧光的4-甲基伞型酮，通过检查荧光强度来分析酶活力。该方法的灵敏度高，既能用于血清，也适用于活检组织、细胞、脑脊液等量小的样本。但是该方法对仪器要求高，不仅需要凝胶过滤除去干扰物质，而且需要荧光分光光度计，不能用于自动化分析，难以进行普及推广。

(2)终点比色法：是以PNP-AFU为底物，底物被酶分解后产生色团，该色团在碱性条件下呈现黄色，利用分光光度法进行定量分析。本方法简便、设备要求不高，但是由于酶底物本身的抗干扰性差，不能解决血清黄疸和溶血、脂血等因素对测定结果的影响，且操作繁琐，所需反应时间长。而且AFU作为酶需要在酸性环境下进行酶促反应，而色团需在碱性条件下呈色，所以也不适合自动化检测，推广难度大。

(3)速率法：以AFU在适宜反应条件下催化含呈色基团的特定底物水解，在一定波长下可使吸光度增加，连续监测吸光度值的变化，可计算出样本中AFU的活性。该方法操作简单，测定时间短，灵敏度及抗干扰性都有所提高，适用于各种半/全自动分析仪器，便于临床单位推广应用。

由于速率法具有便于临床推广应用的特点，近年来，AFU活力测试逐步在临床医学方面得到普遍应用。然而，本方法所采用的底物普遍存在不稳定，灵敏度不够高的缺陷。本发明正是基于此问题，提供了一种高性能的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒的制备方法，并完美解决了底物稳定性及其灵敏度问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术现状，提供一种底物稳定、测定准确、方便使用、稳定可靠且灵敏度高的血清岩藻糖苷酶检测试剂盒。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种血清岩藻糖苷酶检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒由试剂1和试剂2组成，

本发明所述缓冲液为三羟甲基氨基缓冲液、甘氨酸-NaOH缓冲液、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液、MES缓冲液、Good’s缓冲液或硼酸缓冲液中的一种或几种。

本发明所述试剂1的pH在4.0-4.5，试剂2的pH值在7.0-7.5。双试剂可有效提高抗干扰性能，以及更好地利用酶循环保护系统保护试剂2中的底物稳定性。

本发明所述表面活性剂为非离子表面活性剂，优选自非离子表面活性剂吐温-20、曲拉通100、Brij35等的其中一种或几种。上述表面活性剂的选择是通过实验论证发现非离子表面活性剂是本实验中最优的；另外，表面活性剂的选择对于反应灵敏度的提升有很好的效果。