[发明专利]日本血吸虫重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种日本血吸虫重组蛋白，该重组蛋白是由含日本血吸虫Vamp2基因的重组载体经表达而制得。本发明还公开了该日本血吸虫重组蛋白作为日本血吸虫诊断抗原的应用，以及该重组蛋白在制备预防或治疗血吸虫病的疫苗或药物中的应用。本发明的日本血吸虫重组蛋白，在小鼠免疫实验中可诱导小鼠体内产生抗重组蛋白的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体并能达到一个较高水平，动物保护实验结果表明该重组蛋白具有发展为抗血吸虫病候选疫苗及新药物靶标的潜力，诊断抗原的效果评估实验结果表明该重组蛋白具有作为诊断抗原的潜力，应用前景广阔。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种日本血吸虫重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

血吸虫病是一种严重危害人畜健康的重大寄生虫病，流行于全球76个国家和地区，约6.5亿人受感染威胁、2亿人感染，每年死亡人数超过10万。在我国流行的是日本血吸虫病。虽然我国在血吸虫病的防治上已经取得了重大成就，但是由于中间宿主钉螺难以消灭，终末宿主种类多、活动范围广、传染源难以控制，血吸虫重复感染现象严重，且存在免疫逃避现象，全面控制血吸虫病传播的前景仍不容乐观。目前日本血吸虫病的防治难点主要是缺乏安全有效的疫苗；现有的诊断方法敏感性、特异性不理想，且不能区分既往感染和现症感染；吡喹酮是目前唯一大规模应用的药物，且已有抗药性产生的报道。因此要加强血吸虫生长发育关键分子的鉴定，以筛选新的候选疫苗分子、更加敏感、特异的诊断抗原以及新的药物靶标。

日本血吸虫寄生于宿主体内的过程亦是其与宿主不断适应的过程，需要宿主为其提供适宜的生理生化环境，并从宿主体内摄取自身无法合成的营养、激素等信号分子，同时血吸虫能以其复杂的调控机制逃避宿主一系列的抗感染反应，又不会诱发严重的病理损害而使宿主迅速死亡，从而使其生长发育繁殖得以延续。而体被是虫体与宿主接触的直接界面，与虫体的营养摄取、代谢凋亡、信号传导、免疫应答等生理过程密切相关，因此体被表膜蛋白的研究会为进一步发掘日本血吸虫的候选疫苗分子、更加敏感特异的诊断抗原及新的药物靶标提供新的线索。

囊泡运输在细胞的生命活动过程中担任“物流系统”的角色，细胞要把基因表达的产物定向运输到特定的地点行使功能，如神经递质的释放，激素的内分泌及酶和细胞因子的外分泌，胞吞、胞吐等，细胞的这些重大生命过程均依赖于囊泡运输。若囊泡运输出现障碍，则会出现神经系统疾病，代谢性疾病(如糖尿病)和免疫失调病等。囊泡运输的基本过程包括：货物的招募、囊泡出芽、定向运输、入坞锚定、膜融合、货物的释放及蛋白重摄取等，这既是基本的生命过程，又是一个极其复杂的动态过程，受到多种蛋白和调控因子的精密调控。SNARE(可溶性N-乙基马来酰胺敏感因子附着蛋白受体)是促进囊泡膜与靶膜融合的特殊蛋白复合体，被誉为膜融合的“发动机”，而Vamp2(囊泡膜蛋白)是SNARE的重要组成部分，正是其参与形成SNARE的过程拉动了囊泡膜与靶膜的融合。目前的研究表明Vamp2参与形成SNARE的过程是囊泡运输过程中的限速步骤，由此可见囊泡膜蛋白在细胞生命活动中担任着不可取代的角色。

目前关于Vamp2的研究表明：Vamp2主要参与胰岛素依赖性的GLUT4转运过程；其与糖尿病的发病机制密切相关；肉毒神经毒素B型通过裂解Vamp2而发挥其神经毒力作用；Vamp2参与细胞膜的更新成分胆固醇和LDL的运输，并与精卵融合等过程密切相关。还有文献报道日本血吸虫的抗原分子伪装机制可能与虫体宿主间的囊泡运输有关，这将为研究血吸虫的免疫逃避现象提供新思路。本实验室在日本血吸虫体被表膜蛋白质组学的研究中发现了日本血吸虫囊泡膜蛋白SjVamp2，但是其在日本血吸虫生长发育过程中发挥的重要作用还有待进一步研究。

到目前为止，还没有出现关于日本血吸虫SjVamp2重组蛋白作为血吸虫疫苗、或作为敏感特异的诊断抗原的公开报道。

发明内容

本发明要解决目前缺乏抗血吸虫高效疫苗的技术问题，提供一种日本血吸虫重组蛋白，该重组蛋白包含日本血吸虫囊泡膜蛋白(SjVamp2)的氨基酸序列，具有良好的免疫原性，适于作为抗血吸虫病候选疫苗。