[发明专利]一种锡生藤多倍体诱变的快速繁殖方法

说明书

技术领域

本发明涉及锡生藤组织培养的快繁方法，属于植物技术领域。

背景技术

锡生藤，Cissampelos pareira L. 防己科，系傣族习用药材，傣名为亚红龙。木质藤本；枝细瘦、有条纹，通常密被柔毛，很少近无毛，叶纸质，心状近圆形或近圆形，长，宽均约2-5厘米，顶端常微缺，具凸尖，基部常心形，有时近截平，很少，微圆，两面被毛，上面常稀疏，下面很密；掌状脉5-7条，在下面稍凸；叶柄常密被柔毛，比叶片短。雄花序为腋生，伞房状聚伞花序，单生或几个簇生，花序轴和分枝均细瘦，密被柔毛；雄花；萼片长1.2-1.5毫米，背面被疏而长的毛；花冠碟状；聚药雄蕊长约0.7毫米；雌花序为狭长的聚伞圆锥花序，长达18厘米，通常不超过10厘米，叶状苞片近圆形，在花序轴上覆瓦状重叠、密被毛；雌花：萼片阔倒卵形，长约1.5毫米；花瓣很小，长约0.7毫米。核果被柔毛，内果皮阔倒卵形，长3-5毫米，背肋两侧各有2行皮刺状小凸起，胎座迹为马蹄形边缘所环绕。生于热带河边、沙滩，荒地、山坡石缝中或灌木丛中的潮湿地，分布于云南，春、夏二季采挖，除去泥沙，晒干，本种根含多种生物碱，其中锡生藤碱为一种较好的肌肉松弛剂。根含D-槲皮醇、海牙亭碱、海牙亭宁碱、筒箭毒次碱、粒枝碱、海牙剔定碱、锡生藤醇灵、(++)-4″-甲氧基筒箭毒次碱。根皮含筒箭毒次碱、海牙亭碱、海牙亭宁碱、粒枝碱、门尼斯明碱、锡生藤醇灵、软齿花根碱等。藤含海牙亭碱、筒箭毒次碱、粒枝碱、(++)-4″-o-甲基筒箭毒次碱。药用功效为消肿止痛，止血，生肌，目前锡生藤尚未见人工繁殖。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是一种锡生藤诱变育种的快速繁殖方法，本发明方法可以快速获得大量的锡生藤多倍体幼苗，繁殖率高，目的性强，操作简单，成本低。

为解决上述技术问题，本发明采用下列技术方案：

取锡生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min，再用1%的过氧化氢溶液消毒5min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的锡生藤花粉，接种到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50-150mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22±2℃，诱导出来的分散稳定的愈伤组织接种到VR+TDZ2mg/L+NAA0.1mg/L+色氨酸24μmol/L的培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2500lx，光期12h/d，温度23±2℃，分化出来的胚接入MS培养基中进行壮苗生长，附加蔗糖60g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照20000lx，光期14h/d，温度28℃。

采用本发明制备的锡生藤成活率高，根茎粗壮，利用率大，利于大规模种植。

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

取锡生藤的花粉，用70%的乙醇消毒0.5min，再用1%的过氧化氢溶液消毒5min，无菌水冲洗5次，消毒处理过的锡生藤花粉，接种到MS+NAA0.4mg/L+KT6mg/L+秋水仙素50mg/L的培养基中进行愈伤组织的诱导，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，暗光照，温度22±2℃，诱导出来的分散稳定的愈伤组织接种到VR+TDZ2mg/L+NAA0.1mg/L+色氨酸24μmol/L的培养基中进行愈伤组织的分化，附加蔗糖30g/L，琼脂6.5g/L，pH5.8，光照2500lx，光期12h/d，温度23±2℃，分化出来的胚接入MS培养基中进行壮苗生长，附加蔗糖60g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照20000lx，光期14h/d，温度28℃，成活率80%。

实施例2